文档介绍：微载体灌注培养 Vero 细胞狂犬病疫苗简述: 1 研究的主要内容是利用微载体连续灌注培养 Vero 细胞(一种从非洲绿猴肾脏上皮细胞系,它是连续的非整倍细胞可以经过许多分裂周期而不衰落) ,进而制备狂犬疫苗。 2该研究引入了生物反应器的使用,采用不断加入新鲜的培养基,又不断放出反应器中的液体,保持培养环境相对稳定的灌注培养法。在提高细胞生长密度的前提下,有助于产物的纯化。 3各种材料: 微载体 Pharmacia Cytodex-1 , 无钙镁 PBS 洗涤 2次, 37"C 浸泡 2h,121 ℃高压灭菌 30min ,置 4℃贮存待用,使用前用细胞培养液洗涤 2次。狂犬病毒 aG株,细胞培养液为含 lO%的牛血清的 199 。 生物反应器,工作容积 。培养时微载体浓度 10g /L,pH控制在 ,温度 37"C ,溶解氧(DO) 值设为 5O,搅拌速度 30~50r /min 。 4大致的过程:5L的生物反应器中,10g/L 微载体的 199 培养基,Vero 细胞至细胞浓度达到 1xlO5 /mL ,培养使细胞浓度 6-7xlO5 /mL; 接种狂犬病毒 VaG 株,继续培养 24h ;收获病毒原液;将原液浓缩、灭活、纯化制成狂犬疫苗。 5 探索不同细胞浓度接种反应器,结合微载体的影响。结果显示, 1xlO5 /mL 时细胞生长状态良好、维持时间长、利于病毒生长。灌流体积也在 为最合适。 6用10万分子量超滤膜浓缩,经 Sepharose 4Fast Flow 分子筛纯化。分析: 1利用生物反应器的灌流培养细胞,这种培养方法使培养基的浪费比较大,加大了实验的成本,不利于工业生产推广。虽然灌流培养细胞法优势突出,但是为了利于推广,可以在核算成本的前提下,适当改进成分批式或者流加式培养细胞法。 2细胞贴在微载体上生长,为了将细胞处理下来,