文档介绍：正相柱反相柱的使用
特别注意HPLC使用过后的系统清洗：含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法：
1、 先用100%的纯水冲洗，打开排放阀，用3~5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗
2、 再用95：5的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30~60分钟后停泵。此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。
3、 最后用100%的甲醇清洗整个系统，用1ml/min的流量，洗2分钟左右，然后关机。如果流动相中不含盐，则使用上述第三步清洗即可。
当固定相的极性大于流动相的极性时，，，可使用如正己烷的低极性流动相，在用于反相色谱时，（Silica）以及其他具有极性官能团***基团，如（NH2，APS）和***基团（，CPS）的键合相填料。，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相,常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）.
正相柱和反相柱缘于，柱上固定相与流动相之间极性的对比。若固定相极性大于流动相，为正相柱，反之，为反相柱。通常为反相柱应用较多。所有色谱均适用，包括纸色谱和薄层。
现在一般都用反相，正相在样品对水敏感等特殊情况下才使用。
正相的固定性是极性的，流动相是非极性的，适于分离强极性物质。
反相的固定性是非极性的，流动相是极性的，适于分离弱极性物质。
正相色谱柱与反相色谱柱的区别
本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。以下是详细说明：
1、正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团***基团，如（NH2，APS）和***基团（，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），***仿（Chloroform），二***甲烷（Methylene Chloride）等。
2、反向色谱 反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙***等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
色谱的正反相是根据固定相和流动相的相对极性比较而区分的。一般情况如下：
正相色谱：固定相极性大于流动相极性：常见的色谱柱有：硅胶色谱柱、氨基色谱柱、苯基色谱柱、***基色谱柱等。
反相色谱：固定相极性小于流动相极性：常见的色谱柱有：C18色谱柱、C8色谱柱等。
“生化色谱网”在色谱方面非常专业，建议你去看看。那里对色谱产品都按照“正相、反相”进行了区分。你查一下就知道了。
正相色谱用的固定相通常为硅胶，以及其他具有极性官能团，如***基团和***基团的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷、***仿、二***甲烷等。
反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已***等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18、C8、C4、C6H5等。
反相色谱切换正相色谱流程：
1、先将色谱柱用相应的溶剂冲洗干净，然后将色谱柱拆下来密封保存。用双通将进样器与检测器连接。
2、将贮液瓶装入300ml的二次蒸馏水，。注意观察泵压。
3、将流速渐次降到0ml/min，把二次蒸馏水更换为甲醇，，。
4、用同样的方法将甲醇更换为异丙醇、四氢呋喃，各冲系统1h。
5、最后将四氢呋喃更换为预先配制好的流动相冲系统1h，同时将柱塞杆清洗系统的10%异丙醇更换为流动相，保持50-60滴/m