文档介绍：学号:201100369011 分类号:O629 硕士学位论文苦瓜蛋白降脂活性成分纯化及功效评价 Studies on the purification and pharmacological effects of ponents from Momordica charantiaL. 研究生姓名:王东红指导教师:殷军港(教授) 学科门类:理学专业名称:有机化学论文提交日期:2014年4月万方数据烟台大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名: 日期: 年月日学位论文使用授权说明本人完全了解烟台大学关于收集、保存、使用学位论文的规定,即: 按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本; 学校有权保存学位论文的印刷本和电子版,并提供目录检索与阅览服务; 学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文; 在不以赢利为目的的前提下,学校可以公布论文的部分或全部内容。(保密论文在解密后遵守此规定) 论文作者签名: 导师签名: 日期: 年月日万方数据烟台大学硕士学位论文 I 摘要苦瓜是葫芦科苦瓜属植物苦瓜(Momordica charantiaL,MC)的果实,原产于印度东部。现代研究证明苦瓜具有降血脂、降血糖、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等功效。本论文以新鲜苦瓜为原料,对苦瓜粗提物的降血脂活性进行了研究,并通过脂肪肝细胞模型从中筛选出降血脂活性肽MCP3-2,同时对苦瓜多肽的降脂机理进行了研究。第一部分,绪论。概述了苦瓜的药理作用及其活性成分;介绍了高脂血症的危害及治疗措施,以及生物活性肽的研究进展;综述了苦瓜降血脂作用的研究方法及意义。第二部分,苦瓜粗提物对SD大鼠的降血脂作用。通过喂食特殊加工的高脂饲料8周后建立高脂血症大鼠模型,建模成功后给予不同剂量(50、100和200mg/kg) 的苦瓜粗提物和辛伐他汀(10mg/kg)。灌胃4周后,检测血脂和肝脂指标,计算脏器指数,并进行肝脏病理学观察。实验结果显示,不同剂量(50、100和200mg/kg) 的苦瓜粗提物和辛伐他汀均可显著降低高脂血症大鼠的血脂浓度和肝脂浓度,另外对大鼠体重和脏器质量没有影响,但是可显著降低肾周脂肪质量。本实验中最佳有效剂量为100mg/kg,该剂量苦瓜粗提物可显著提高了HDL-C的浓度,同时降低LDL-C的浓度,降低动脉粥样指数,表明中剂量苦瓜粗提物具有一定抗动脉粥样硬化的作用。此外,苦瓜粗提物显著降低肝脏中ALT、AST和FFA浓度,对肝脏有保护功能。肝脏病理切片显示,苦瓜粗提物显著减少了肝细胞质内脂肪空泡的数量,对脂肪肝有一定的治疗作用。以上结果表明苦瓜粗提物各剂量组均能显著降低血清和肝脏中TG浓度,修复肝组织结构形态及功能,具有显著的利肝清脂的功效。第三部分苦瓜多肽的分离纯化。本部分运用硫酸铵沉淀蛋白法和透析技术对苦瓜进行初步分离得到苦瓜粗提物(MCE),用Sephadex G-75凝胶层析柱对苦瓜粗提物进行初步分离得到3个级分:MCP-1、MCP-2 和MCP-3。并结合体外降血脂实验,筛选出具有降血脂活性成分MCP-3,利用Sephadex G-25凝胶层析柱对万方数据烟台大学硕士学位论文 II MCP-3进行纯化得到3个级分,并筛选出具有降血脂活性成分MCP3-2和MCP3-3。利用分析技术确定了苦瓜粗提物及其级分的化学成分。结果表明,苦瓜的化学组成为:%,%,%,%,%。经过纯化后,各个级分的蛋白质(多肽)含量都达到95%以上。并对级分进行氨基酸组成分析。结果表明:苦瓜粗提物中含量最高的氨基酸为谷氨酸、天冬氨酸和亮氨酸,%。MCP-1中含量最高的氨基酸为赖氨酸、谷氨酸和天门冬氨酸,%。MCP-2中含量最高的氨基酸为谷氨酸、天冬氨酸和丙氨酸,%。 MCP-3中含量最高的是谷氨酸、天冬氨酸和亮氨酸,三者约占氨基酸总含量的 %。MCP3-1中含量最高的是谷氨酸、亮氨酸和酪氨酸,%。MCP3-2中含量最高的是天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸,%。MCP3-3中含量最高的是谷氨酸、丝氨酸和赖氨酸,%。结合体外降血脂活性实验,与其他非活性成分相比, MCP3-2和MCP3-3中丝氨酸和赖氨酸含量较高,这可能与其降血