第二章蛋白质定性定量分析.ppt

文档介绍：第二章
蛋白质的定性定量分析
第二章蛋白质定性定量分析
蛋白质定性分析 (qualitative analysis)
确定样品中是否有蛋白质存在，以及存在的是何种蛋白质
蛋白质定量分析 (quantitative analysis)
确定样品中总蛋白含量，或者某种单一蛋白成分的含量
第二章蛋白质定性定量分析
蛋白质含量的测定方法（重点掌握）
蛋白质相对分子量测定 (SDS-PAGE)
等电聚焦电泳 (IEF)（一般了解）
蛋白质的免疫印迹分析 (western blot)
第二章蛋白质定性定量分析
第一章 蛋白质的含量测定
蛋白质的含量测定
基于蛋白质的
元素组成特点
基于蛋白质的
化学显色反应
基于蛋白质的
光吸收特性
第二章蛋白质定性定量分析
蛋白质元素组成的特点
各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16％
由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因此
只要测定生物样品中的含氮量，就可以根据
以下公式推算出蛋白质的大致含量：
100克样品中蛋白质的含量 ( g % )
= 每克样品含氮克数× ×100
1/16%
第二章蛋白质定性定量分析
一、紫外光谱 (A280)吸收法
这一方法可用来快速检测溶液中是否含有
蛋白质成分。通常用于柱层析过程中检测蛋
白质的洗脱峰
第二章蛋白质定性定量分析
原 理
色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在280 nm附近
大多数蛋白质含有这两种氨基酸残基，所以测定蛋白质溶液280 nm的光吸收值是分析溶液中蛋白质含量的快速简便的方法
芳香族氨基酸的紫外吸收
第二章蛋白质定性定量分析
优 点
快速
缺 点
核酸可引起强干扰作用
芳香族氨基酸含量差异可以起误差
对蛋白质无破坏性
不是严格的定量，适用于测定蛋
白质粗提液
第二章蛋白质定性定量分析
计算方法
标准曲线法
蛋白质浓度 (mg/ml)
=×A280-×A260
注意事项
石英比色杯
调零所用溶液
配制标准蛋白所用溶液
光密度范围
第二章蛋白质定性定量分析
二、考马斯亮蓝G-250检测法
这是一种迅速、可靠的通过染色法测定
溶液中蛋白质含量的方法
第二章蛋白质定性定量分析