文档介绍：1 免疫学实验指导生命科学与工程学院生物工程、生物技术、动物医学专业用冯玉萍[ 分组]:4人/组,实验用动物、器材以每组需要量设计[ 班级] 2006 生物工程、生物技术[ 学生人数]: 65人/58 人。分 16组/15 组[ 时间] 2008 年3月— 2008 年7月两周一次 4 学时。目录实验一、免疫学实验动物的一般操作实验二、实验动物免疫器官、免疫细胞观察实验三、实验动物的采血方法、动物血清及红细胞的制备方法实验四、淋巴细胞分离与 E 玫瑰花环形成试验实验五、 IgG 的分离和纯化实验六、玻片凝集试验(ABO 血型鉴定) 实验七、环状沉淀试验实验八、琼脂扩散试验(单向) 实验九、巨噬细胞吞噬功能试验实验十、白细胞吞噬试验 2 实验一、免疫学实验动物的一般操作[ 实验原理] 实验动物的基本操作是免疫学实验的基础, 抗原对动物机体的免疫效果,通过实验动物进行验证,因此必须掌握实验动物的一般操作技术。[ 目的要求]1、实验材料的准备(棉球、注射器的准备与消毒)(演示) 2、了解免疫学实验常用动物的生物学特性、用途及其健康要求。[自学] 3、学****实验动物的编号、抓取、固定和几种不同的注射途径方法。 4、练****对小白鼠给药的几种不同途径的注射方法。 5、练****小白鼠的取血方法。 6、学****血涂片的制作及染色;观察动物血液中有形成分的形态结构特点。[ 实验动物]小白鼠, 2只/组,共需 18~20只。[试剂]⑴ 3% 来苏儿或 3% 石炭酸 100~150 ml/ 组; ⑵无菌生理盐水 100~150ml/ 组;磷酸盐缓冲液 20~50ml/ 组(带滴管、染色用)。⑶ 3~5% 苦味酸 20~50ml/ 组(带滴管,编号用); ⑷ 5% 品红 20ml~50ml/ 组(带滴管,编号用); ⑸瑞特氏( wright ‘ s)染色液 50ml/ 组(带滴管,染色用); *抗凝剂一支[器材]⑴ 1ml 注射器及针头 2支/组; ⑵碘酒棉球、酒精棉球、无菌干棉球各适量; ⑶手术剪刀 2把/组;镊子 2把/组;载玻片、盖玻片各 6片/组; ⑷毛细吸管 2支、 50— 100ml 烧杯 1个/组⑸显微镜 6台/组[6] 鼠笼 1个/组[ 操作步骤]1 、练****小白鼠抓取、编号、皮下注射、皮内注射、腹腔注射的方法。(见《免疫学实验》 P9-13 。 2 、练****小白鼠尾静脉取血法。( P15 ) 实验报告要求: 1、时间、地点、操作人、同组人、指导老师。 2、实验原理、目的要求 3、实验操作记录(实验步骤、结果) 4 、分析总结:依据实验原理、目的要求,分析总结实验是否成功,是否达到实验目的?为什么? 5、对实验动物编号有何实际意义,你对书中关于小白鼠的编号方法有何想法?有无更简便、实用的方法? 6、若给动物注射传染性材料应注意些什么? 3 实验二、免疫器官与免疫细胞观察[ 实验原理]免疫器官、免疫细胞是动物免疫系统的主体。在胸腺、脾脏中有大量淋巴细胞存在,在外周血液中有大量淋巴细胞和白细胞等免疫细胞存在,发挥着免疫监视作用。[ 目的要求]1、练****血涂片的制作 2、学****小鼠颈椎脱臼致死的方法,观察小白鼠的解剖结构; 3 、学****脾脏、胸腺的触片制备与染色方法;观察小鼠脾脏触片、血液涂片中的免疫细胞,并画图。[ 方法与步骤]1、练****血涂片的制作( 3张/组) 1) 准备一张洁净玻片,取血 1 滴于玻片右侧, 另取一光边玻片的一端,放在血滴前方, 并逐渐后移接触血滴, 血液立即沿推片散开, 然后将推片与载片保持 30一45 度角, 平稳地向前推动, 至玻片另一端, 载玻片上便留下一层血膜。良好的血膜象舌头,头、体、尾鲜明,厚薄适宜、分布均匀,边缘整齐,两侧留有空隙。 2 )染色: A 、瑞特氏(WrightFs ) 染色法: ①. 血涂片制成后可在空气中挥动,使迅速干燥,以免血细胞皱缩。选择良好的血片,用特种玻璃铅笔画出两边界限( 注意保留尾部,因体积大的细胞往往在此出现),以防染液外溢。②在血膜上滴加几滴瑞氏染色液, 左右晃动,使染液完全覆盖血膜,注意染液不宜过多而溢出界限,亦不能过少而干燥。③1— 2min 后, 滴加等量磷酸盐缓冲液或生理盐水,2— 3min 后,可见表面有金属光泽,即可用清水轻轻冲去染液,待血片自然干燥或用滤纸轻轻吸干。在正常的情况下,血膜外观染成粉红色。 3)镜检: 先在低倍镜下检查血片,染色是否合格, 血细胞分布是否均匀等, 然后换高倍镜或油镜观察,并绘图,指出淋巴细胞与白细胞、红细胞。如自己图片不成功,则对教学片进行观察和绘图。结果: 血液涂片瑞特氏染色法染色的结果: 4 中性粒细胞: 是白细胞中数量最多的细胞,胞体大于红细胞,细胞核蓝紫色, 呈分叶形,可分 2— 5 叶。叶间有细丝相连;细胞浆为粉红色,其中充满褐灰色的小颗粒。