实验五 过氧化物酶酶活性的测定.ppt

文档介绍：实验五 过氧化物酶活性的测定
——愈创木酚比色法
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一、实验目的
熟悉测定过氧化物酶活性的常用方法及其测定原理。
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二、实验原理
RH2+ H2O2→2H2O + R
在有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在 470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量 470 nm 处的吸光度变化速率来测定过氧化物酶活性。
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三、实验材料
菠菜、油菜
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四、仪器用品与试剂
分光光度计，研钵，移液管，吸管。
愈创木酚，30％过氧化氢，磷酸缓冲液，反应混合液。
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五、实验步骤
1、 g ，剪碎，放入研钵中，加入5ml磷酸缓冲液研磨成匀浆，以 4000 rpm 离心 15 min ，上清液即为粗酶液。
2、取1ml酶液，用磷酸缓冲液定容至25ml。
3、取稀释液1mL，加入反应混合液3 mL，立即于470 nm 处测定吸光度（OD）值，每隔1min读数一次。
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六、实验结果
式中： ΔA470 ——反应时间内OD变化值。
VT   ——提取酶液总体积（mL）。
W   ——植物鲜重（g）。
t    ——反应时间（min）。
过氧化物酶活性=
ΔA470×VT
W×t
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七、思考题
说明植物过氧化物酶在植物代谢中的意义。
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