交叉配血凝聚胺法.docx

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交叉配血凝聚***法
交叉配血（凝聚***法）
1. 原理
凝聚***（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合，再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚***溶液，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。加入中和液后，仅由凝聚***引起的非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。
2. 标本采集：
标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将细胞配成5％盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。
标本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐全。
3. 标本储存：急诊标本30分钟内完成操作，标本应至4℃冰箱保存7天。
4. 标本运输：室温运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染。溶血标本，标签不齐全不能作测定。
6. 试剂：
试剂名称：凝聚***试剂(polymatching)
试剂生产厂家：(台资)珠海贝索生物技术有限公司。
试剂组成：
试剂1. 低离子介质(LowLonic Medium，LIM).试剂打开使用后，可置室温贮存，未开封者2-25度贮存，有效期为2年。
试剂2. 凝聚***溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。
试剂3. 重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。
试剂4. ％生理盐水。
7. 仪器：
血型血清离心机：80-2型离心机 江苏金坛市大地自动仪器厂
离心机：江苏金坛市大地自动仪器厂
电热恒温水箱：江苏金坛市医疗器械厂
显微镜：XSZ-H3(中国）
8. 操作步骤及结果判断：
供受者红细胞用生理盐水配成3-5％的细胞悬液。加样量均为：血清2滴，红细胞悬液1滴。主管：受血者血清+供者红细胞悬液;次管：受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。
各管分别加低离子介质混匀置室温1分钟。加凝聚***溶液2滴，混匀，置室温15秒。
1000g(3400rpm)，离心10秒，弃上清液，管底保留约液体。轻摇
试管，目测红细胞有无凝集。如无凝集，则重做前面试验。
加入2滴重悬液，轻轻混合，肉眼或显微镜下观察结果。
凝块在1分钟内分散，试验结果为阴性，供受