文档介绍：还原糖和总糖的测定(3,5- 二硝基水杨酸比色法) 一、实验目的 1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理 2、学****比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或***基的糖类。单糖都是还原糖,双糖和多糖不一定是还原糖,例如乳糖和麦芽糖是还原糖,蔗糖和淀粉是非还原糖。利用各种糖的溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。对非还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成还原性单糖进行测定,再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物,而氧化剂 3,5- 二硝基水杨酸则被还原为棕红色的 3- 氨基-5- 硝基水杨酸。在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系,利用分光光度计在 540nm 波长下测定光密度值,查对标准曲线并计算,便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时,每断裂一个糖苷键需加入一分子水,所以在计算多糖含量时应乘以系数 。三、实验材料和试剂 1 、实验材料面粉 2 、实验试剂① 1mg/m l葡萄糖标准液准确称取 80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖 100mg ,置于小烧杯中,加少量蒸馏水溶解后,转移到 100m l容量瓶中,用蒸馏水定容至 100m l,混匀,4℃冰箱中保存备用。②3,5- 二硝基水杨酸( DNS ) DNS 和262m l2M NaOH 溶液,加到 500m l含有 185g 酒石酸钾钠的热水溶液中,再加 5g结晶酚和 5g亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后加蒸馏水定容至 1000m l,贮于棕色瓶中备用。③碘-碘化钾溶液:称取 5g碘和 10g 碘化钾,溶于 100m l蒸馏水中。④酚酞指示剂:称取 酚酞,溶于 250m l70% 乙醇中。⑤6M HCl 和6M NaOH 各100m l。四、实验器材具塞璃玻刻度试管:20m l× 11大离心管: 50m l×2 烧杯: 100m l×1三角瓶: 100m l×1 容量瓶: 100m l×3刻度吸管: 1m l×1;2m l×2;10m l×1 恒温水浴锅沸水浴离心机扭力天平分光光度计五、操作步骤 1 、制作葡萄糖标准曲线取7 支具塞刻度试管编号,按表 1 分别加入浓度为 1mg/m l 的葡萄糖标准液、蒸馏水和 DNS 试剂,配成不同浓度的葡萄糖反应液。表 1葡萄糖标准曲线制作管号 1mg/m l 葡萄糖标准液(ml) 蒸馏水(ml) DNS (ml) 葡萄糖含量( mg ) 光密度值( OD-540nm ) 将各管摇匀,在沸水浴中准确加热 5min 取出,冷却至室温, 用蒸馏水补足至10m l ,加塞后颠倒混匀,在分光光度计上进行比色。调波长 540nm ,用0号管调零点,分别测出 1~6号管的光密度值。以光密度值为纵坐标,葡萄糖含量( mg ) 为横坐标,在坐标纸上绘出标准曲线。 2 、样品中还原糖和总糖的测定①还原糖的提取准确称取 食用面粉,放入 100m l 烧杯中,先用少量蒸馏水调