文档介绍：ABO 血型鉴定( 生理盐水法) ABO 血型鉴定(生理盐水法) 2009-01-22 14:07 【大中小】【我要纠错】 1. 原理根据红细胞上有或无 A 抗原或/和B 抗原,将血型分为 A 型、 B 型、 AB 型及 O 型四种。A 型红细胞膜上含有 A 抗原,B 型红细胞膜上含有 B 抗原, AB 型红细胞膜上含有 A、B 抗原,抗 A 、抗 B 试剂是分别针对 A 抗原和 B 抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验, 通过正、反定型准确鉴定 ABO 血型。所谓正定型,是用已知的抗 A 、抗 B 试剂与受检者的红细胞混合时,与抗 A 试剂发生凝集者即为 A型,与抗B 分型试剂发生凝集者即为 B型, 与抗 A、抗B 试剂均发生凝集者即为 AB 型,与抗 A 、抗 B 试剂均不凝集者即为 O 型。所谓反定型, 是用已知A 细胞和B 细胞来测定血清中有无相应的抗- A或/ 和抗- B. 2. 标本采集 标本种类:新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。 标本要求: 抗凝剂:如用抗凝血,多主张用 EDTA K2 (㎎/dL )抗凝。 用手指末梢血作血型检测时, 最少样品量为 100ul , 如手指有冻疮,则主张采耳垂血。 3. 标本储存: 2 小时内完成实验,室温放置下不超过 8 小时, 4℃-8℃保存不超过 48 小时。 4. 标本运输:室温运输 5. 标本拒收标准:细菌污染、溶血标本不能作测定 6. 试剂 试剂名称: ABO 血型检测试剂 试剂生产厂家:南京华欣药业生物工程有限公司 试剂组成试剂 1 :抗 A 分型试剂(蓝色),效价 1: 128 ,2℃-8℃避光保存,室温放置不宜过久。试剂 2 :抗 B 分型试剂(黄色),效价 1: 128 ,2℃-8℃避光保存,室温放置不宜过久。试剂 3:5%A、B及O 型红细胞盐水悬液,自制。配制方法:分别采取已知 A、B、O 三种血型的红细胞,经盐水洗涤 3 次,以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。红细胞悬液的配制悬液浓度(%) 压积红细胞(滴) 盐水(滴) 2 5 10 201111 2ml ( 40) ( 16) (8) (4) 为了防止红细胞悬液敏感性不一致, 可随机采取 3 个或以上的健康***血液,按 A、B、O 型分别混合后,按上法制备。 7. 操作步骤 玻片法 取清洁玻片 1张( 或白瓷板 1块), 用肥皂水刷洗后晾干, 用蜡笔划出小格,并注明 A、B 字样。将抗 A 试剂、抗 B 试剂各一滴分别滴于玻片( 或瓷盘)上A、B处。分别取等体积待检血样(5% -10 %红细胞悬液或全血)于抗 A 试剂和抗 B 试剂。 另取洁净玻片 1 张(或白瓷板 1 块),用蜡笔划成方格, 标明 A 细胞、B 细胞和 O 细胞, 用滴管各加受检者血清 1滴, 再分别用滴管滴加 A、B和O 型试剂红细胞悬液 1 滴。 用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀, 同时不停的摇动玻片( 或瓷盘) 并观察血型凝集( 或溶血) 反应。如以玻片做试验时,也可用低倍镜观察结果。 试管法 取洁净小试管(内径 10mm × 60mm )2 支,分别标上 A、B 字样, 用滴管分别向 A 管滴加抗 A 分型试剂 1滴。向B 管滴加抗 B 分型试剂 1 滴。向 A、B 管各滴加待检血样的 5 %红细胞悬液各 1 滴,混合。 另取洁净小试管(内径 10mm × 60mm )3 支,分别标明 A、 B和O 细胞。用滴管分别加入受检者血清 1 滴于试管底部, 再分别以滴管加入 A、B和O型5 %红细胞悬液 1 滴,混合。 摇匀后以 1000 转/ 分的速度离心 1 分钟判定结果。将试管轻轻摇动, 使沉于管底的红细胞浮起, 先以肉眼观察有无凝集( 或溶血) 现象。如肉眼不见凝集, 应将反应物倒于玻片上, 再以低倍镜检查。 8. 结果判断 观察结果时既要看有无凝集, 更要注意凝集强度, 此有助于 A、B 亚型、类 B或 cisAB 的发现。 凝集强度判断标准: 4 +=红细胞凝集成一大块,血清清晰透明。 3 +=红细胞凝集成数小块,血清尚清晰。 2 +=红细胞凝块分散成许多小块,见到游离红细胞。 1 +=肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞。±= 镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多游离红细胞。 MF =混合凝集外观是指镜下可见少数红细胞凝集, 而绝大多数红细胞仍呈分散分布。-表示阴性,镜下未见凝集,红细胞均匀分布。 按下表报告受检者红细胞 ABO 血型 ABO 血型正反定型结果—+—O 细胞———— 9. 临床意义