文档介绍：第十二章第十二章免疫学技术免疫学技术第一节、抗体的制备第一节、抗体的制备一、抗血清的制备(一)用于免疫的动物?主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等, ?抗原来源与动物种属的关系:种属差异越远,免疫原性越强。?动物种类的选择:根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量。?一般制备抗血清,多用家兔和山羊,因其反应良好,能够提供足够数量的血清。?用于免疫的动物应适龄,健壮,无感染性疾患,雄性, ?注意饲养,消除个体差异,及免疫过程中的死亡。?家兔中纯种新西兰兔最好,一组三只,兔的体重以 2~ 3kg 为宜。(二)免疫途径?如肌肉内、皮内、皮下、静脉内、腹腔内、淋巴结内注射等, ?一般用皮下或背部多点皮内注射,每点注射 左右。?途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性, 如激素、酶、毒素等生物学活性抗原,一般不宜采用静脉注射。(三)佐剂?注射抗原时加入的能增强抗原的抗原性、刺激机体产生较强免疫反应的物质,称为免疫佐剂。佐剂的作用: ?延长抗原体内存留时间?增加抗原刺激作用?刺激免疫活性细胞增多?促进 T细胞与 B细胞互作。?不完全福氏佐剂:羊毛脂:石腊油=1 :5, 视需要可调整为 1:2~9( V/V ), ?福氏完全佐剂:在每毫升不完全佐剂加入 1~ 20mg 卡介苗。配制方法: ?按比例将羊毛脂与石腊油置容器内,用超声波混匀,高压灭菌,置 4℃下保存。?免疫前取等容积佐剂与免疫原溶液混合, 振荡器混匀成乳状,也可研磨均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液,加完后再继续研磨成乳剂,至滴于冰水上 5~ 10min 内完全不扩散为止。?为避免损失抗原,亦可用一注射器装抗原液,另一注射器装佐剂,二者以聚乙烯塑料管连接,然后二者来回反复抽吸,约数十分钟后即完全乳化。(四)免疫方法?抗原剂量:首次为 300 ~ 500 μg,加强免疫约为首次的 1/4 左右。?每2~3周加强免疫一次。加强免疫时用不完全佐剂, ?首次免疫时皮下注射百日咳疫苗 ,加强免疫时不用。