文档介绍：实验目的、原理、材料、内容、结果、分析讨论
实验目的
嗜热链球菌的筛选、分离鉴定及发育树鉴定
实验原理
乳酸菌是一类能利用可发酵的糖产生大量乳酸的细菌通称。这类细菌广泛分布在土壤 植物根、茎、湖泊及动物的体内。乳酸菌从形态上可以分为球菌和杆菌，并且均为革兰氏染 色阳性。在缺少氧气的环境中生长良好的兼性厌氧菌或厌氧性细菌。
嗜热链球菌来源于乳制品。它是一种耗氧的革兰氏阳性菌，以两个卵圆型为一对的球菌 。在选择性培养基，嗜热链球菌会长成米色的菌落。嗜热链球菌 也可在含有下列任一种糖类的培养基上生长。这些糖类包括半乳糖、葡萄糖、果糖、乳糖、 蔗糖。乳糖的降解需要一种特殊的酶，叫0-半乳糖昔酶。乳糖不耐受的人身体内就是缺乏 了这一种酶。嗜热链球菌是一种能产生0-半乳糖昔酶的细菌，所以可以帮助乳糖的消化。嗜 热链球菌个体中多有2球体连接、3、4球体连接、5、6球体连接的，8球体以上连接的和单 球体的少见。所以个体大小差距较大。--6um范围内。
利用是嗜热链球菌的选择性培养基一改良型M17培养基，可以筛选出酸奶中的嗜热链 球菌，然后进行筛选并分离纯培养。
传统的微生物分类主要依靠形态学特征以及生理生化特征进行，这些方法在微生物分类 鉴定中发挥过重要作用，但也存在着鉴定准确性差、繁琐耗时等缺点。目前细菌的分类鉴定 开始进入分子水平，各种基因型分类方法也应运而生，如(G+C)mol%、DNA杂交、rDNA 指纹图、质粒图谱和16SrDNA序列分析等等。细勘6S rDNA以及丝状真菌(及酵母)的 核糖体rDNA内部转录间隔K(Internal Transcribed Spacer, ITS)序列分析鉴定已经被大多数研 究者所接受和采用，成为一种常用的微生物鉴定方法。rRNA是研究细菌进化和亲缘关系的 重要指标，它含量大(约占细菌RNA总量的80%),并存在于所有细菌中。rRNA基因由保守 区和可变区组成，在细菌中高度保守，素有“细菌化石”之称，是细菌系统分类学研究中最 有用和最常用的分子钟。原核生物的rRNA分为3种，分别为5S rRNA、16S rRNA和23S rRNA,并且它们位于同一操纵子上。rRNA的基因在大多数原核生物中都具有多个拷贝， 拷贝数目从1到14不等。其中，16SrDNA序列分析已经成为细菌种属鉴定和分类的标准方 法，大约2500个种的16SrDNA全序列已经被报道。根据它们的序列同源性，已经构建了各
种属的系统发育树。也是进彳丁微生物资源快捷鉴定的重要方法。
16S rDNA以及ITS序列的扩增需要微生物染色体DNA作为模板。首先提取微生物的染色 体DNA,以此为模板，加入通用引物进行扩增，对扩增出来的片段提交MNCBI-BLAST网 站进行序列比对，最终得知该微生物的种属归类。
实验材料
改良型M17琼脂培养基：、、、、硫 、、、、、蒸溜水1000ml DNA扩增溶液体系：16sRNA上游引物、16sRNA下游引物、Taq酶
溶液和试剂：去离子水、结晶紫溶液、碘液、95%酒精、刚果红溶液
仪器：超净工作台、高压灭菌锅、培