文档介绍：北方民族大学
学生实验报告
院（部）生物科学与工程学院
姓名学号
专业生物工程班级_
同组人员
课程名称微生物学类实验
实验名称产酶微生物的分离、纯化与选育
实验日期 2013. n 批阅日期
成绩教师签字
北方民族大学教务处制
产酶微生物的分离、纯化与选育
实验意义：
酶是生物体内进行生物化学反应的催化剂，在生物体中已发现的酶有2500多种。由于酶促反应的特异性强，反应温和，安全无毒，环境污染少，在洗涤剂、皮革、纺织、诊断、制药等领域具有广泛的应用价值。能由工业生产的50多种酶制剂蛋白酶、淀粉酶等，大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌生产的。通过本实验，学会从自然界中分离产酶微生物的方法，军中的纯化技术及其高产菌的选育技术。
蛋白酶产生菌的分离与纯化
：学****从自然界中分离蛋白酶产生菌并纯化。
2实验原理
许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽鞄杆菌是常见的蛋白酶产生菌。本实验将土壤样品（或其他样品）悬液加热处理，杀死非芽抱细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽抱杆菌，将其接种到酪蛋白平板进行培养，根据酪蛋白平板的水解圈作初筛。也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养，分离筛选其他蛋白酶产生菌。
3实验仪器与材料
土壤样品或其他富含蛋白质的样品、牛肉膏蛋白豚培养基平板、酪蛋白平板、无菌水（带玻璃珠）、芽抱染色液；显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒等。
4实验方法与步骤
1配制酪素培养基：、NaCl 0. 5g,酪素1. 0g,琼脂2. 0g,蒸馆水lOOmL 左右，调节pH 7. 6-&0。
1. 1配制方法：称取酪素lg,先用少量2%NaOH润湿，玻璃棒搅动，再加适量的蒸憎水, 在沸水浴中加热并搅拌，至完全溶解，补足水量至lOOmL,加入其他成分，调整pH值，灭菌备用。
：
1）采集土壤样品，用无菌水制备1： 10 土壤悬液。
2）取1： 10 土壤悬液5ml,然后将悬液按10匕10= 10「3、10「4梯度稀释，注入试管中。
3）将这些试管放入75-80 °C水浴中热处理10 min,以杀死非芽鞄细菌。
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1）将培养基灭菌处理。
2）取加热处理过的土壤悬液100-200 UL,涂布接种到酪素培养基平板，将平板倒置，于
30-32 °C培养 24-48 h„
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1）根据酪蛋白平板的水解圈作初筛，挑选出单菌落的蛋白酶产生菌。
2）将挑选出的单菌落用平板划线法接种到牛肉膏蛋白联培养基上，然后将平板倒置放于培养箱中24—48ho
4. 5芽抱杆菌的染色判断
1）挑去菌落涂片固定。
2）滴加1—2滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液
4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
5）用番红水溶液复染1分钟，水洗至水为无色。
6）待干燥后，置油镜观察，芽抱呈绿色，菌体呈红色。
1. 4. 6蛋白酶产生菌的保存培养：
1）用斜面划线法，取纯化鉴定后的菌种接种