文档介绍：精氨酸激酶(AK)的表达及其纯化
1
目录
研究背景
1
实验材料
2
实验方法
3
结果及分析
4
2
蛋白质的分离纯化
蛋白质的分离纯化是对蛋白质进行研究的一项必需的和基础的工作。目前常使用的分离纯化的方法或技术都是在了解蛋白质性质和结构特点的基础上建立的。目标蛋白质的分离决不是一件轻而易举的事情，因为要把它与性质、大小和结构十分相似的其他蛋白质分离开来存在许多困难。有些目标蛋白质在组织细胞内的含量很低，这无疑将增加获取足量蛋白质的难度。
3
▲目标蛋白质的分离纯化程序主要包括:
⑴材料的选择；
⑵组织匀浆和破碎细胞获取粗提取液；
⑶蛋白质初步提纯；
⑷选择一种或几种合适的方法除去杂蛋白,直至完全 纯化；
⑸目标蛋白的鉴定。用于研究目的蛋白质通常应保持它的生物活性。因此，在目标蛋白质的整个分离纯化过程中要在较低温度下(0－4℃)操作，注意使用蛋白酶(使蛋白质降解的酶)的抑制剂，避免使用剧烈条件，以免蛋白质特定的折叠结构受到破坏。
4
一、蛋白质是***电解质
根据蛋白质的分子结构，很容易得出构成蛋白质的***解离的基础是氨基酸残基的侧链可解离的基团。
作为***电解质，每种蛋白质都有其等电点(pI) ，这与它所含的氨基酸种类和数量有关。
所有的蛋白质，不管它具有什么样的功能，都能在细胞内起一定的缓冲作用。
5
1. 蛋白质的电泳分离
凝胶电泳是目前常用的一种生化方法。用于蛋白质分离的凝胶主要是聚丙烯酰***凝胶，该凝胶是由单体丙烯酰***和交联剂甲叉双丙烯酰***配制而成，其最大的特点是凝胶的孔径可根据需要进行选择。以聚丙烯酰***凝胶为支持物，可进行非变性电泳和变性电泳。
6
1 透析
2 层析原理
3 凝胶过滤
4 离子交换层析
5 亲和层析
6 电泳
主要内容
7
1 透 析
按照分子大小进行分离。分离取决于透析袋截留的分子量。
透析液
浓缩的蛋白混合样品
透析袋
开始透析
处于平衡状态
8
层析也称之色谱，基本原理是分析样品作为流动相流过固相时，由于样品中的各个成分与固相相互作用不同使得样品中的各个成分通过固相的速率产生了差别，从而达到分离样品中各个成分的目的。
层析因固相介质不同又分为离子交换层析、分子筛层析和吸附层析等各种层析。
2 层析原理
9
将作为固相成分的不溶性基质，例如葡聚糖凝胶、纤维素、树脂等填充到柱子中，用平衡液平衡。
然后加样品，再用适当的溶剂洗脱。
样品中各种成分通过柱子取决于与固相成分的相互作用，最后以不同速率被洗脱出来，达到将各个成分分离的目的。
10