文档介绍：微生物菌种保藏方法 1 、传代保存法:有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时,会很快死亡, 因此在这种情况下, 只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存, 它是最基本的微生物保存法, 例如酸奶等常用生产菌种的保存。传代保存时, 培养基的浓度不宜过高, 营养成分不宜过于丰富, 尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。一般地, 大多数菌种的保藏温度以 5℃为好, 像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用 37℃进行保存,而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。传代培养保存法虽然简便,但其缺点也很明显,如:①菌种管棉塞经常容易发霉;②菌株的遗传性状容易发生变异;③反复传代时, 菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低;④需要定期转种, 工作量大; ⑤杂菌的污染机会较多。 2 、液体石蜡覆盖保存法:该法较前一种方法保存菌种的时间更长, 适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。此法可防止干燥, 并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其具有方法简便的优点, 同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物( 如产孢能力低的丝状菌) 的保存, 而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。 3、载体保存法: 即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下几种,如①土壤保存法:主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。方法是在灭菌的土壤中加入菌液, 立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥, 然后冷藏或在室温下密封保存。保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜, 土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是: 取适量土壤(5克) 置于塞有棉塞的试管中, 加水或加入充分稀释的液体培养基( 以含水量为土壤最大持水量的 60% 为宜), 然后高压灭菌。再将需保存的微生物进行大量接种, 培养至菌丝能用肉眼确认的程度为止, 移入干燥器中经短时间干燥或风干后密封,冷藏或室温保存。②砂土保存法: 取清洁的砂, 筛去掉大砂粒, 并用磁铁吸去砂中铁屑, 再用 NaOH 溶液、 10%HCl 溶液和水交替清洗数次, 干燥后, 置于试管或安瓶管中保持 2~ 3cm 深, 再经干热灭菌后, 加入 1ml 菌种培养液, 经充分混匀后, 放入真空干燥器中, 完全干燥后熔封保存。也可用二份洗净的砂(经 HCl 预处理)和一份贫瘠、过筛的黄土搀和后灭菌, 再进行菌种保藏。③硅胶保存法:以6~ 16 目的无色硅胶代替砂子, 干热灭菌后, 加入菌液。加菌液时, 由于硅胶的吸附热常使温度升高, 因而需设法加以冷却。④磁珠保存法: 将菌液浸入素烧磁珠( 或多孔玻璃珠) 后再进行干燥保存的一种方法。在螺旋口试管中装入 1/2 管高的硅胶(或无水 CaSO4 ), 上铺玻璃棉, 再放上 10~ 20 粒磁珠, 经干热灭菌后, 接入菌悬液, 最后冷藏、室温保藏或减压干燥后密封保藏。本法对酵母菌很有效,特别适用于根瘤菌,可保存长达两年半时间。⑤麸皮保存法: 在麸皮内加入 60% 的水, 经灭菌后接种培养, 最后干燥保藏。⑥纸