文档介绍：报告基因分析
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1. 基本概念和实验原理
报告基因: 编码可供检测的酶与蛋白质的基因。是现代分子生物学研究领域中用于分析结构基因旁侧区域潜在的顺式元件(如启动子、增强子和沉默子等)和反式作用因子相互作用关系的一种重要工具。
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可作为报告基因的条件:
① 编码产物的活性不受宿主细胞的干预。
②编码产物在宿主细胞中不存在, 易于区别。
③编码产物的活性的测定必须具有快速、简便、
灵敏度高、重复性好的特点。
常用的报告基因：***霉素乙酰转移酶基因(CAT)、
β-gal、荧光酶基因(Luc)
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2. 用途：
基因转录调节的研究：最初的功能。
作为分子标记的应用：如利用 GFP 作为标记物检测基因在植物 酵母和哺乳动物细胞中的转移。
生物大分子之间的相互作用：激活剂或拮抗剂在改变活细胞中受体活性作用等方面的研究。
其他方面的应用：RNA 干扰研究、影像技术及药物筛选等。
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3. 实验技术：
基因克隆
转染细胞
产物检测
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基因克隆的特点和技术路线
特点：分子水平上操作，细胞水平上表达
技术路线：
1 分离制备目的DN***段和载体
2 目的DNA与载体的剪切
3 目的DNA与载体的连接
4 重组DNA分子转化宿主细胞
5 筛选阳性克隆，大量扩增
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在这个过程中：
1.“基因剪刀”
剪切DNA的酶就像一把“基因剪刀”
2.“缝纫针”
连接不同来源DNA分子的酶就像一根“缝纫针”，使二者连在一起
3.“交通工具”
使用载体好比一辆车子
4.“乘客”
有用基因如IL2好比乘客，车子把乘客送进理想天堂（宿主细胞）去繁衍生息，春华秋实，生产我们需要的产品或开展基因治疗（IL2/LAK→抗癌）。
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一、目的基因的获取
直接从染色体DNA中分离
通过mRNA反转录合成 cDNA
从基因组DNA文库获取目的基因
从cDNA文库获取目的基因
PCR扩增目的基因
人工体外合成基因片段
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