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上传人:guoxiachuanyue011 2021/8/1 文件大小:54 KB

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文档介绍

文档介绍:: .
由于HPV不能在体外细胞培养,故不能用简便的血清血检测进行 HPV的诊断和分型。临床上
用于检测 HPV的方法包括细胞学方法、免疫组化、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹和
PCR
等,其中以PCR方法的敏感性最高,是目前应用最多
感染的HPV型别、含量、持续时间决定病变的发展与预后 ,是进行HPV检测的主要内容。
目前主要是通过应用分子生物学方法进行 HPV DNA勺检测。
1、现有的HPV实验室主要检测手段:
① 聚合酶链反应(PCR, Polymerase Cha in Reactio n): 扩增位于两段已知序列之间的
DN***断的方法。该法有较高的敏感度 ,可进行HPV分型,缺点是对实验室环境要求较高 ,容
易发生样本间的交叉污染,从而导致假阳性率高。
② 核酸杂交检测
有较好的特异性和敏感度,还可以进行HPVDNA勺分型,各种核酸杂交检测方法有一定的 优缺点。
A核酸印迹原位杂交
适用于HPV分型和HPV DNA分子量鉴定,虽然灵敏度高,但因操作复杂,需要新鲜组织标 本,不便在临床上大规模使用。
B斑点印迹
其敏感度和特异性均低于核酸印迹原位杂交法 ,虽然经济实用,但实验过程存在有放射
性污染,是环保所不能轻视的问题。
C原位杂交(in situ hybridization ,—种核酸杂交技术,可用来测定基因或特定核
苷酸序列在核酸分子的所在部位,检测重组体 DNA通过非放射性探针对石蜡组织进行检
测,能作定位检测,假阳性率低,但灵敏度不高,大大降低了临床使用价值。
D杂交捕获法(Hybrid Capture)
杂交捕获试验是利用化学发光对抗体捕获的信号加以放大。 首先使DNA双链释放并分解
成为可以杂交的核苷酸单链 ,DNA单链与RNA组合探针结合为 RNA-DNA杂合体,特异性抗体将 RNA-DNA杂合体捕获,偶联有碱性磷酸酶的第二抗体与 RNA-DNA杂合体结合,碱性磷酸酶使酶 底物发光,根据光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量 ,从而确定RNA-DNA杂合体的含量。能检测 13 种高危型 HPV,包括 HPV16 18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。
各种检测方法的比较
各种检测方法的比较
方法学
灵敏度
特异性
技术特点
细胞学(Cytology)


操作容易,成本较低,准确度较差
斑点印迹(Dot blot )


有一定放射性
核酸印迹原位杂交(southern
blot hybridization )


标准、麻烦,不宜大规模使用
原位杂交(In Situ
hybridization )


蜡块组织包埋内检测 HPV
杂交捕获(HC HC2


无放射性,易使用,高、低危型间有交叉反
应,且不能分型
普通多聚酶链反应(PCR
很高

取材容易,但目前已应用试剂的只能检测少 数单一型别,如6、11、18等,且由于技术上的问 题存在假阳性
2、最新推出的HPV的实验室检测技术
高灵敏度高危型HPV分型多色荧光实时