文档介绍：华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文
第一部分 小檗碱对 NIT-1 细胞胰岛素分泌及葡萄糖激酶
活性的影响
中文摘要
【目的】
观察小檗碱对 NIT-1 细胞在不同浓度葡萄糖刺激下胰岛素分泌的影响，检测小檗
碱对葡萄糖激酶活性及表达的影响，以初步阐明小檗碱在体外促进胰岛素分泌的可能
机制。
【方法】
将 NIT-1 细胞在含不同浓度葡萄糖（高浓度 ( mM)，低浓度 ( mM)）的培
养基中培养，并用不同浓度小檗碱干预，选用生物素作为阳性对照药。用放免法检测
胰岛素浓度，液体闪烁计数法检测葡萄糖利用，生物发光技术检测 ATP 含量，酶法分
析检测葡萄糖激酶活性，Western blot 检测葡萄糖激酶（GK）和葡萄糖激酶调节蛋白
(GKRP)在蛋白水平表达的变化，并用免疫荧光技术检测葡萄糖激酶在细胞核内外转
移。
【结果】
在高浓度葡萄糖刺激下，与空白对照组相比较，小檗碱能使葡萄糖刺激下 NIT-1
细胞胰岛素分泌水平升高，葡萄糖利用增强，ATP 含量增加，GK 活性提高；同时，
小檗碱能使细胞内 GK 表达增加而 GKRP 表达减少，还能使 GK 在细胞浆内的表达增
加，小檗碱的这些生物学效应与已被证实的葡萄激酶激活剂生物素相比较无显著差
异。在低浓度葡萄糖刺激，小檗碱和生物素的上述活性与空白对照组比较无显著差异。
【结论】
小檗碱能促进 NIT-1 细胞在高浓度葡萄糖刺激下的胰岛素分泌；这种效应的可能
机制是：小檗碱作为 GK 激活剂，使 GK 表达增强而 GKRP 表达减少，促进 GK 向细
2
华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文
胞核外转运，从而使 GK 活性增强，最终使胰岛素分泌增强。
【关键词】
小檗碱；生物素；胰岛细胞；NIT-1；葡萄糖激酶
3
华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文
第二部分 小檗碱改善高糖高脂饮食加小剂量 STZ 诱导的 2 型
糖尿病大鼠靶组织内质网应激的研究
【目的】
建立高糖高脂饮食加小剂量 STZ 诱导的 2 型糖尿病大鼠模型，观察小檗碱对 2
型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响，同时检测肝脏和脂肪组织中内质网应激相关分子和
胰岛素信号转导相关蛋白表达的影响，以探讨小檗碱改善胰岛素抵抗、治疗 2 型糖
尿病的分子机制。
【方法】
采用高糖高脂饮食喂养加尾静脉注射小剂量链脲佐菌素（streptozotocin, STZ,
15mg/kg）的方法建立 2 型糖尿病大鼠模型，将造模动物随机分为模型组、小檗碱组、
4-苯基丁酸组，另设正常对照组。药物干预治疗 6 周后，进行口服糖耐量试验（oral
glucose tolerance test, OGTT）并检测各组动物空腹血糖（fasting blood glucose, FBG）、
空腹血清胰岛素（fasting serum insulin, FINS）、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白
和高密度脂蛋白值，并用