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康为RNA提取试剂盒使用说明书.doc

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康为RNA提取试剂盒使用说明书.doc

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文档介绍

文档介绍:RNA试剂盒所含药品:
Component
CW0559S 50 preps
DNase I(DNA酶Ⅰ)
1000 U
10×Reaction Buffer(10×缓冲液)
1000 μl
Buffer RL
35 ml
Buffer RLC
35 ml
Buffer RW1
40 ml
Buffer RW2(concentrate)
11 ml
RNase-Free Water(无RNA酶的水)
10 ml
Spin Columns FL with Collection Tubes(含收集管的吸附柱FL)
50
Spin Columns RM with Collection Tubes(含收集管的吸附柱RM)
50
RNase-Free Centrifuge Tubes( ml)(无RNA酶的离心管)
50
自备试剂:
β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。
实验前准备及重要注意事项:
1.预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2.预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时, M NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
3.提取的样品避免反复冻融,否则影响RNA提取的量和质量。
4.Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇,1 ml Buffer RL加10 μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。Buffer RLC使用时不需加β-巯基乙醇。
5.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
6.Buffer RL和Buffer RLC如果产生沉淀,请加热使其溶解后室温放置。
7.所有离心步骤均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。
操作步骤
1.50-100 mg植物组织在液氮中迅速研磨成粉末,加入600 μl Buffer RL(使用前检查是否加入β-巯基乙醇)或Buffer RLC。涡旋振荡使其充分裂解。 注意:1)Buffer RL主要成分为异硫***酸胍,适用于大多数植物组织的裂解。但有些植物组织(如玉米的胚乳),由于次级代谢产物较特殊,异硫***酸胍使样品产生沉淀,导致RNA提取效果不佳, 此时可加入Buffer RLC替代Buffer RL。2)56℃孵育1-3分钟有助于组织的裂解,但是淀粉含量高的植物不要进行高温孵育。
2.将步骤1所得全部液体转移至已装入收集管的吸附柱(Spin Columns FL)中,12,000 rpm (~13,400×g)离心2分钟,将收集管中的上清液转移到一个新的离心管(自备)中。
注意:1)在吸取液体时可以将枪头尖端剪掉,便于取样。 2)Spin Columns FL可以除去大部分的碎片,但仍会有小部分流出,离心后会在收集管内形成沉淀,在进行下一步时注意