文档介绍：实验 1 大肠杆菌的培养与分离大肠杆菌介绍. (看教材:P19) 一、实验目的二、细菌的培养和分离 : :水、碳源、氮源、无机盐、生长因子。 LB 固体培养基:用于细菌的分离 : (1)划线分离法(2)涂布分离法 LB 液体培养基:用于细菌扩大培养(看教材 P19) 三、灭菌操作(1)实验用具灭菌: (2)培养基灭菌: 高压蒸汽灭菌( 121 ℃、 15min ) ( 1kg/ cm 2压力、 15min ) 例外:有葡萄糖的培养基( 500g/cm 2压力、 30min ) : G6 玻璃砂漏斗过滤(细胞不能通过) 四、设备及用品(看教材 P21) 五、材料(看教材 P21) (看教材 P20) 六、步骤③①②④(1)器具及培养基灭菌(2)自三角瓶向培养皿中转移固体培养基(3)将菌体放入液体培养基中培养(37 ℃摇床振荡培养 12h) (4)菌液划线分离(37 ℃恒温培养 12 ~ 24h), 出现不连续的单个菌落)(5)保存单菌落——划线法接种于斜面(4 ℃冰箱保存) 。(看教材 P22 ~ 23) 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度有些热,但不烫手时,就可以进行倒平板了。 ? 通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基。 ,需要冷却到 60 ℃左右时,才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度? ,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗? 为什么? 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养微生物。操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前灼烧接种环是为了杀死接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到单菌落。划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。 ? 在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么? ,为什么要等其冷却后再进行划线? 以免接种环温度太高,杀死菌种。 ,为什么总是从上一 次划线的末端开始划线? 划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。教材思考与练**** ? ,接触过的器皿应如何处理? 、如何保证不被普通的大肠杆菌所污染?