文档介绍：: 指导教师: 指导小组: 专业名称: 郭春梅刊、明忠教授刘淑清教授生物化学与分子生物学摘要蛇毒(SV)是由多种生物活性多肽、蛋白质、核苷、***和金属离子等组成的复杂混合物。(LAAOs)作为蛇毒中的一个重要成分,有着多样的生物学活性,(H202)赋予蛇毒一定的毒性。目前,从蛇毒中分离得到的LAAOs以数十计,大量研究结果表明,(SV-LAAOs)可诱导或抑制血小板聚集、刺激水肿形成、诱导出血或溶血, 具有抗凝活性、细胞毒性、抗病毒、抗肿瘤、抗血栓、抗菌消炎、抗利什曼原虫、诱导细胞凋亡和抗HIV活性等多种生理作用。SV-LAAOs是一个新的毒性蛇毒蛋白群,是非常有趣的一类活性物质,具有潜在的药物开发价值和临床应用前景。采用离子交换、凝胶过滤层析及高效液相色谱层析从长白山白眉蝮蛇(AgkistrodonblomhoffiiUssurensis),命名为。Akbu-***凝胶电泳() 上显示单一泳带,结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱( mass spectrometry)表征结果: kDa的二聚体。Akbu-LAAO经胰蛋白酶胶内酶解,产生的肽段经高效液相色谱. 电喷雾串联质谱()进行序列分析,蛋白鉴定采用TurboSequest Bioworks软件完成,质谱鉴定得到了1 O个肽段序列:VVEELKR、YPVKPSEEGK、 KFWEDEGIHGGK, VTVVYQTPAK,HDDIFAYEK, IKFEPPLPPK, SAGQLYEESLGK FDEIVGGMDK 、RFDEIVDGMDK FDEIV DGMDKLPTAMaYR。Akbu-LAAO与来源于蛇毒Calloselasma rhodost,Agkistrodon ha&s,Daboia russelliisiamensis和Trimeresurus stejnegeri的LAAOs的氨基酸序列有同源性,。采用辣根过氧化物酶偶联法,()为酶的反应底物,发现Akbu-;,Akbu- 。电感耦合等离子体原子发射光谱法()检测结果表明每个 Akbu-LAAO分子中含有4个Zn2+,Zn2+, 但是Zn2+的去除却使Akbu-LAAO的最大荧光发射峰的强度降低61%,这说明Zn2+ ,但有助于维持酶结构完整性。外源金属离子Mg、Mn2+、Ca2+、Ce3+、Nd3+、C02+和’rb3+可以增加Akbu-,另外,Ni2+、La3+和Gd3+轻微地降低了Akbu-, Fe2+、Cu2+和Eu2+/Eu”Xff其水解活性影响不大。,但抑制作用有显著差别,以动物血小板代替人血小板进行类似实验有一定风险,结果表明Akbu-LAAO在治疗心血管疾病方面将起到一定的作用。Akbu-LAAO能够显著抑制金黄色葡萄球菌生长,是相同条件下头孢类药物剂效的18倍,可作为潜在的抑菌剂使用。总之,本论文采用四步层析纯化方法从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离得到了一种新的天然的LAAO,具有一定潜在的药物开发价值和临床应用前景。对、酶学性质、结构和生物活性的表征,为Akbu-LAAO的进一步开发和应用奠定了一定基础。关键词: 2 Characterization of anew L..aminoacidoxidase from Agkistrodon blomhoffii ussurensis snake venom Masterdegree candidate:Guo Chunmei Supervisor:Professor SunMingzhong :Professor LiuShuqing Major:Biochemistry andMolecular Biology Abstract Snake prise mixturesofvariousbioacfiveproteins,polypeptides,m