文档介绍：实验四醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验目的?掌握电泳法分离血清蛋白质的原理; ?掌握血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳的操作方法。 : 是指带电粒子在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。在一定 pH条件下,不同的蛋白质由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,即它们的电泳迁移率不同,因此,可使它们分离 : 内在因素: 蛋白所带净电荷的量、蛋白的大小和形状外界因素: 电场强度、溶液的 pH值、溶液的离子强度和电渗现象实验原理 ~ 之间, 的缓冲溶液中均带负电荷,在电场中向正极泳动。血清中各种蛋白质的等电点不同,所以带电荷量也不同。此外各种蛋白质的分子大小各有差异,因此在同一电场中泳动的速度不同。分子小而带电荷多者,泳动较快;反之,则较慢。 (如:***、***仿、***乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构,厚度约为 120 μm,有很强的通透性,对分子移动阻力很小。该薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高,对样品无拖尾和吸附现象等优点。现已广泛用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、血红蛋白、酶的分离和免疫电泳等方面。 5. 经醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白按电泳速度分为 5条区带,从正极端依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白及γ球蛋白,经染色可计算出各蛋白质的百分含量。实验器材 1. 电泳仪: 为电泳提供直流电源。 2. 电泳槽: 为电泳提供场所。 3. 血清加样器:可用盖玻片或微量加样器。 4. 醋酸纤维素薄膜: 2cm ×8cm 5. 其它: 培养皿(直径 9-10cm )、滤纸、镊子等。实验材料和试剂材料:牛血清试剂: 1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液() 2、% 氨基黑 10B 染色液 3、漂洗液实验操作 ,各自装有缓冲液,接不同的电极, 红色为正极, 黑色为负极。每个槽上都有一根可移动的横杆,滤纸的一头搭在横杆上,另一头浸入缓冲液中,形成了滤纸桥。点好样的醋酸纤维薄膜就搭在滤纸桥上。 2. 醋酸纤维素薄膜的润湿将醋酸纤维素薄膜完全浸泡于缓冲液中约 30min 后,用镊子小心夹住薄膜一端,放在折叠的滤纸中,并用滤纸吸干表面液体。 (无光泽面朝上),将点样器在血清中沾一下(量薄薄一层为好),再在膜条一端 -2cm 处轻轻水平地落下并随即提起, 这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。此步是实验的关键。 ( 点样面朝下),另一端平贴在阳极端支架上(见下图)。要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直,中间不能下垂。连接好电泳仪。在室温下电泳,打开电源开关, 调节电流强度 膜宽度电泳时间约为 1h。电泳后,关闭电泳仪切断电源。