斑马鱼（Danio rerio）intelectin基因的进化及功能研究.pdf

文档介绍：中山大学
硕士学位论文
斑马鱼（Danio rerio）intelectin基因的进化及功能研究
姓名：操珍
申请学位级别：硕士
专业：生物技术
指导教师：徐安龙
20060501
摘要地了解分子的进化，尤其剁氐等脊椎动物由硬骨鱼过渡向高等脊椎动物转变的胞为，以贝碳さ哪谠嘞赴猟构建文库，利用抑制性差减杂交同时，我们将隚芯哂写砟赖奈镏值膇椿蚪辛吮榷裕／痗靉腥厩昂蟮陌呗碛銁虻谋泶锬Ｊ浇辛思觳狻Ｍ币检测了其在斑马鱼胚胎时期的表达『青况。结果表明，大多数继匾斓卦谀掣鲎橹此外，我们还探讨了融合表达载体的构建及重组蛋白在大肠杆菌中表达纯化细菌结合实验。了解了哪钚浴⒌ヌ墙岷咸匾霫生和细菌识别特异性。为进～总之，对家族基因的序列分析、组织分布、系统发生学分折和蛋白活性研究，为进—步研究其构效关系及在斑马鱼体内的作用打下了劁菝考怀觥Ｍ保参N颐歉钊关键词：斑马鱼，琱，家族，组织分布，分子进化，凝集活性本文以杀鲑气单胞菌刺激的斑马鱼内脏细琒际跎秆×司妇碳ず笤诎呗碛闾迥谟盏表达的免疫相关基因。从目庵校颐堑鋈×税呗碛愕膇基因，并且在数据库中检索到由基因组测序预测产生的斑马鱼蛋白家族娼，。我们对这些基因分别进行了全长分析和蛋白结构预测等生物信息学分析。利用系统发生学分析的方法，详细讨论了／易宓慕叵怠利用实时荧光定量际对杀鲑气单臌菌或某些组织中表达，胚胎时期的表达谱也很有特色，预示了这些基因在斑马鱼体内行使着不同的功能。条件。利用．诤系鞍捉辛顺醪降幕钚允笛椋汉煜赴⑻且种剖笛橐约步的功能研究奠定了基础。关键时期的分子进化提供了新的线索。斑马鱼家族基因慕肮δ苎芯，，
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第滦髀目前研究表明鱼类是最早拥有获得眭免疫的脊椎动物。鱼类不仅拥有发达的先天性免时内几乎所有的系统基本发育完成，如循环系统、神经系统等瞝．，斑马鱼／斑马鱼属鲤科短担尼鱼属，原产于南亚，是一种常见的热带鱼。斑马鱼体型纤细，成体长Ｆ涮宀嘤邢癜呗硌淖菹蛱跷疲食瓢呗碛恪．呗碛阕魑Q芯慷韵蟮挠攀疫系统，同时也开始具备发育相对完善的后天性免疫性系统。因此，作为—种脊椎动物的新型模式生物一一斑马鱼开始逐渐地被广泛应用到各个学术领域当中并成为不可多得的研究工具。斑马鱼自身具备许多的优势使其成为免疫学研究中良好的模式生物。呗碛闩咛ピ谄浞⒂诩涫峭该鞯模钡椒⒂恋天依然能够观察其内部组织结构。如果在较早期加入阳谏厣傻幕约寥绫斤畴澹蛊渑咛タ梢晕秩透明，起码发育至第烨暗呐咛ザ际怯美醋髡逶辉咏坏牧己貌牧稀；韭愣园呗鱼早期免疫系统发育的研究。呗碛愕呐咛ゲ坏该鞫曳⒂俣瓤欤谡７⒂跫;蚣际鹾陀ü獗昙窍嘟岷希诎呗碛阒械玫搅顺浞值姆⒄购陀τ茫晌Q究基因功能和特异细胞或组织标记的有力工具。年林硕领导的小组首先实现了用痮斑马鱼基因的进化及功能研究，●
宿主和致病菌衢基因工程改造和遗传突变分析的感染生物模型系统，为进一步研究非人们普遍所接受的├砺酆透拍钍艿搅撕艽蟮某寤鳌匕如以特异性嘞礁是无法完成的。因此，需要—种方便开展的模式动物用于替代晰人类被用于正向遗传越多自钾勘砻鳎蘼凼窃诜肿铀健⑿藕磐坊故窍赴较忍煨悦庖吆秃筇煨悦庖叨一蚱舳忧躺ü獾鞍表达的转基因斑马鱼。在随后的血细胞系移植，研究斑马鱼血细胞的发生、发育及其组成中奠定了基础。年另—特异细胞标记的斑马鱼品系成功建立，它利用虻钠舳油赣ü獾鞍谆蛟诎呗碛中表达并传代籐；／。该品系的建立，为研究斑马鱼适应性免疫系统的建立和调控机制提供了良好的条件。呗碛闶墙⒚庖呒膊《锬Ｐ偷睦硐氩牧稀年仁紫冉⒘讼妇感染致病性链球菌呗碛隳Ｐ汀８醚芯垦∮昧辞蚓／痑作为病原菌对斑马鱼进行攻击实验，得到了较为全面的感染过程、致死栽量、生存曲线资料，从而建立了特异性免疫反应中宿主和病原体相互奠定了坚实的基础。帽曜嫉腅诱变方法，可对斑马鱼实施大规模的饱和诱变，这也是其他脊椎动物目前所不能及的。这种方法需要较大规模的空间和人力来完成，在较小一些的实验室学的筛选。最后，由于目前已知生物中，鱼类是最早具备获得性免疫系统的纲泼档龋。这使对斑