第三章 核酸的分离与检测(1).ppt

文档介绍：Chapter 3 Separate and investigate target gene
Wellcome to Genetic Engineering
By Nieguangjun
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从哪儿提取（Where）？
怎么提取（How）？
提到什么程度（What）？
会出现什么问题（Questions）？如何解决（Solution）？
核酸提取的原则和基本要求
核酸提取的一般过程
关键试剂的作用
核酸的部分特征
核酸提取的常用方法
核酸提取经典案例
核酸提取的注意事项
核酸提取出现的问题及对策
核酸提取的相关说明
主要内容
核酸提取的原则和基本要求
Principle and steps
Principle
保持核酸的完整性；
提高核酸的质量（纯度和浓度）。
Requirements for purification
不存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；
其他事物大分子（Pr、sugar and lipid）
其他核酸污染
核酸提取的一般过程
Principle and steps
Steps
样品准备（取材）
破细胞（物理法、化学法、酶法）；
除杂质（蛋白质、脂类、糖类和不需要的核酸）；
沉淀提纯

－内容物释放
、纯化
，并去除杂质
 

破碎细胞-方法
机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法；
化学试剂法：用SDS或CTAB处理细胞； 
酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使细胞壁破碎。
破碎细胞-来源
动物：小牛胸腺۰动物肝脏、血液和肌肉组织等۰鱼类精子；
植物：种子的胚中都含有丰富的DNA。
微生物：谷氨酸菌体含7%~10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大肠肝菌含9%~10%（培养过夜）。
Note： 从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。 对于低等生物。如从病毒中提取DNA 比较容易，多数病毒DNA 分子量较小，提取时易保持其结构完整性。 从高等动植物中提取DNA难度大一些。因分子量较大，易被机械张力剪断。
破碎细胞（来源-方法）
微生物：溶菌酶、SDS裂解。
高等植物：捣碎器破碎、液氮研磨。
酶法：蛋白酶，如胰蛋白酶，
冰冻法：反复冻融或液氮冻后组织捣碎。
动物：液氮处理后用匀浆器破碎。
细胞器DNA：首先纯化细胞器。

以上处理时均要同时加入核酸酶抑制剂