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纾锄乞导师签名:≮夕%刍作者签名:阚钢霆作者签名:闹确需日期:必灸阾月≥/曰学位论文原创性声明⒈C芸冢凇!D杲饷芎笫视帽臼谌ㄊ椤湖南大学学位论文版权使用授权书日期:Ⅻ曷嵩隆日年隆日日期:本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版;允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于⒉槐C荜朐谝陨舷嘤Ψ娇蚰诖颉啊ⅲ
摘要食物安全、环境监测、疾病诊断以及反细菌战等领域都涉及到对病原菌的检测。大肠杆菌:作为一类严重威胁公共健康的病原菌,已经得到了食品安全、疾病诊断、环境监测等多个领域的高度重视。它主要通过受污染的食物盟肉制品和原料奶等蛉死啻úィ佣⒍嘀旨膊。绯鲅P猿ρ住⒏剐旱龋严重时可导致死亡,给人类的健康带来极大的困扰。在对大肠杆菌:的管理与控制中,快速而准确的诊断至关重要。因此,本论文瞄准大肠杆菌:快速、灵敏检测这一重要性,在对各种病原菌检测方法进行简要综述的基础上,开展了基于荧光纳米标记与水凝胶技术用于大肠杆菌:的快速、灵敏检测研究,主要包括以下几个方面的工作:一、基于二氧化硅荧光纳米颗粒与核酸染料乃晕⒊上窦术用于大肠杆菌:的检测研究将荧光纳米标记技术与激光共聚焦显微成像法相结合,发展了一种新型的基于二氧化硅荧光纳米颗粒与核酸染料乃晕⒊上窦际跤糜诖蟪杆菌:的检测。利用联吡啶钌趸栌ü饽擅卓帕6匝蚩勾蟪杆菌:抗体进行标记,:的特异性捕获,同时以核酸染料韵妇怂峤腥旧ǎ妇吞逑抵械哪擅卓帕M啪厶迩挚@矗佣实现了对大肠杆菌:的双色标记,并通过激光共聚焦显微镜进行免分离的荧光成像检测。结果表明,该方法可成功应用于缓冲液体系和混合细菌样品中目标大肠杆菌:的特异性检测,特别是在仅含ツ勘昃幕旌涎分腥阅芄鄄到具有明显黄色荧光的大肠杆菌:,且整个检测步骤包括样品预处理可在内完成。该方法则具有较好的灵敏度,可检出痬哪勘晗妇罚采用针对其他病原菌细胞壁抗原的特异性抗体,该方法有潜力发展成为一种通用技术用于多种病原菌的快速和较准确检测。二、基于磁纳米颗粒富集结合二氧化硅荧光纳米颗粒标记的双色流式细胞术用于大肠杆菌:的检测研究将磁纳米颗粒富集技术、基于二氧化硅荧光纳米颗粒的免疫荧光分析法与流式细胞术相结合,发展了一种新型的基于磁纳米颗粒富集结合联吡啶钌二氧化硅荧光纳米颗粒标记的双色流式细胞术用于大肠杆菌:的检测。首先利用表面修饰甘露糖的磁纳米颗粒将待测样品中的目标菌在外加磁场的作用下富集起来,再采用二氧化硅荧光纳米颗粒标记的抗体对样品中目标大肠杆菌:进行免疫荧光标记后,以核酸染料匝分邢妇暮怂峤荧光纳米标记与水凝胶技术用于大肠杆菌:的检测研究Ⅱ
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系和实际样品——矿泉水中的大肠杆菌:进行检测。结果表明,通过磁纳米染色,从而将细菌与样品中的碎片杂质区分开来,最后通过多参数流式细胞术对样品中双色标记的大肠杆菌:进行检测与分析,并将该方法用于对缓冲液体颗粒富集作用、二氧化硅荧光纳米颗粒的信号放大作用及核酸染色,显著地提高了检测灵敏度,减小了由纳米颗粒团聚以及纳米颗粒对杂质碎片的非特异性吸附所引起的假阳性信号,对缓冲液体系和实际样品的检测下限分别为痬肠杆菌:,并且比基于标记的传统流式细胞术具有更高的灵敏度,整个检测步骤包括样品预处理可在内完成,该法有望发展成为一种通用的方法用于食品检验、医学诊断和环境保护等领域中各种病原菌的快速检测。三、基于甘露糖功能化的水凝胶用于大肠杆菌:的检测研究利用伴刀豆球蛋白多价结合能力,结合水凝胶技术与核酸染色技术发展了一种基于甘露糖功能化水凝胶的大肠杆菌:检测方法。首先以过硫酸铵4呋粒募谆叶为加速剂,,然后将氨基化甘露糖交联到希佣票噶斯δ芑乃骸=鲜龊铣傻乃河样品共孵育后,以韵妇暮怂峤腥旧ǎ詈罄没钐逵ü獬像系统对目标大肠杆菌:进行荧光成像。结果表明,该方法可成