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文档介绍

文档介绍:内蒙古医学院
硕士学位论文
分泌链霉亲和素的菌株的分离、链霉亲和素性质的研究
姓名:刘丽
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:琳娜;付亮
20000601
中文摘要直鏊直医堂篷亟±婴巍垒堂焦迨塞塑链霉亲和素是由链霉菌分泌的一种能与生物素结合的蛋白质,未见分离分泌链霉亲和素菌株工作的报道,狙芯康哪康氖谴庸谕寥乐分离产链霉亲和素的优良菌株。由不同地域取土,接种高氏一号平板选择培养基,选取可能目的菌落,接种葡萄糖一天门冬酰***液体培养基,用发现有昕梢圆煌潭鹊牟鶶执又醒〕霾鷖慷嗾命名为鼋徊郊āK鷖鯯—电泳,分子量为们和层析提取的标记辣根过氧化物酶,制备试剂,与国外同类产品做比较,在显色强度、背景深度、平台值、免疫比值方面均超过或类似国外同广泛用于免疫学及分子生物学检测试剂的制备。/生产链霉亲和素的链霉椒ḿ觳馀嘌锨澹≡癫鶶辍9布觳株可疑菌落,从中类产品。初步工作表明本文中发现的菌株可以作为产的生产菌株。链霉亲和素链霉菌菌菌株在世界上仅见一株报道一,国内关键词辣根过氧化物酶标记
.—,甌.猘.琽.狿..瑃瑃甌一疭甌.甋.
分泌链霉亲和素的菌株的分离、链霉亲和素性质的研究直蓥直医堂医亟±班蕉生堂焦堡塞塑把牧嫌敕椒链霉亲和素是年状未覵菌培养液中提得的肭和索相似,能与生物素特异结合,结合常数为“/怯肭缀退啾龋诩觳饪乖豢固系统时,其非特异性结合远比为低,尤其在免疫组化和肿釉咏患觳庵校负跷薇尘跋色。八十年代以来,国外即将生物素一链霉亲和素糜贓、免疫组化、肿釉咏灰及单链闹票福谖夜惨丫柚讼低程岣呒觳獾拿舾卸龋档捅尘跋陨ā5牵夜的试剂大多是靠进口,试剂价格昂贵,从而大大限制了此敏感方法的推广和使用,我国免疫工作者已经意识到这一点,做了若干工作、ⅰ埃酝贾票腹膕月愎诘男枨螅撬门嘌的菌株均是世界上通用的美国菌种协会提供的產一淙凰茄芯苛诵矶培养与提取的方法¨“O氪笈票窼昙荢约粱褂幸欢ǖ睦选D芊翊幼约旱墓土上筛选出好的菌株,以用于大批量的生产,成了目前人们关注的问题。本研究旨在从我国土壤中筛选出优良的菌株,提取分离高纯度的,用于标记辣根过氧笛椴牧主要试剂小鼠腹水,生物素标记的羊抗小鼠中山生物公司ち瓷锼乇昙堑睦备趸锩C郎锕こ坦,邻苯二***,谎前被锼厍碇侵美国静品贼腔嫉1一羧酸,辣根过氧化物酶拦鶶静罚琑.,过碘酸钠,硼氢化钠诜肿,免疫组化试剂盒鹤詊┲猩缴镏破饭,臼易灾频囊恢昕购说タ,一二氨基联苯***美国,链霉亲和素拦鶶公司跛⑻***崆饽啤⒁叶迹***崮频染9治龃俊主要仪器洁净工作台本┰绿呈笛橐瞧鞒籆型分光光度计虾7治鲆瞧鞒恒温培养箱旖蚴笛橐瞧鞒电子分析天平虾L炱揭瞧鞒一℃低温冰柜毡維公司。化物酶玫礁咧柿康膕约痢
内鏊直匿堂瞳亟圭型塞生堂焦迨塞堂低温高速离心机拦鶶公司狧水浴震荡器跏卸5缱蛹际蹩7⒂邢薰一显微镜毡静真空干燥箱一上海市实验仪器总厂—凝胶干燥仪H鸸型切片机鹿猇型病理捞烤机本┖Sゴ锟萍挤⒄构障嗷日本晕⒄障啾庖日本笛榉椒分泌链霉亲和素菌株的分离及鉴定.嘌闹票高氏一号培养基的配制,按文献浚张ǘ%葡萄糖,.%。,デ脂,%,琽.,灭菌,直径矫螅棵灰禾迮嘌呐渲疲次南住尽埃张ǘ%葡萄糖,%蛋白胨,%天冬酰***,ソ湍阜郏.%,%,,%C鹁灰禾迮嘌虻呐渲疲次南注瑁黄豆饼粉浸汁张ǘ%的黄豆饼浸汁原液,サ钠咸烟牵.サ牡鞍紫伲.%的,的琼脂,%鹁分别在不同的时间、植被状态及地域取土样.每个土样大概取耍叭胛蘧酱校克土样溶于辽鹁校≡龋仓—种樱雇寥莱恋恚缓笥孟疚芪毫升上清液,注入辽拿鹁校猛椒ㄏ∈—危褪/与的样品悬浮液。将上述两种悬浮液的辽直鸬卧诤呤弦缓排嘌谋砻妫妹鹁AО敉吭龋旁ノ孪淠谂养天,然后根据菌落形态、气生菌丝特点等挑选菌落,将菌落接种在孔板的液体培养基校在温箱中培养欤缓蠹觳馑粞〉木涫欠穹置诹疵骨缀退亍小鼠腹水用的的碳酸盐缓冲液按∈停么艘喊酌副臧澹靠。埂S肞,磷酸盐缓冲液含终浓度为ネ挛.サ逑次。每次种樱尤肷锼乇甑难蚩剐∈驣,屯孵育,冲洗,冲洗危次种樱尤氪饩昱嘌海娣跤小时,冲洗,冲洗危看分钟,加入长链—用磍:∈,℃孵育,冲洗,冲洗危看分钟。加入邻苯二***底物液,每孔椅孪陨ǎ分钟,每孔加入终止反应。以蛋清及司作为阳性对照,以为阴性对照,目测和酶标仪比色判断结果。分离出来的阳性菌株接种高氏一号培养基,根据菌落的形态有攴畔呔环掷氤隼矗别培养天,选单个菌落接种液体培养基绦嘌天,用椒ḿ觳馍锨逡褐械腟量,选产量高者再接种高氏一号培养基培养,共纯培养三次,最后选择产最高的那株放线菌做为生产菌株狶。.值谋4婕拔榷ㄐ将纯培养紊秆〕龅纳暧谝婕耙旱14妫直鹩诎肽辍⒁荒暌院蟾