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各种DNA提取方法提取方法提取方法提取方法
一,基因组DNA提取方法
制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长
度不小于100・200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证 DNA的完整1•生，为后续的实验打下基础。主要是CTAB方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠 法超声波法研磨法冻融法。2化学方式：异硫氧酸肌法碱裂解法3生物方式：酶法。根据核酸分离 纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等
试验步骤：1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。 2、细胞重悬于冰冷的 PBS漂洗
一次，离心收集。试验步骤2再重新作一边。3、加入5mlDNA提取缓冲液，(1 Ommol/%SDS)混 匀。4、加入25ul蛋白酶K使终浓度达到100ug/ml混匀，50C水浴3h 5、用等体积的酚抽提一次， 2500rpm离心收集水相，用等体积的(酚，***仿，异戊醇)混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相 6、用等体积的***仿，异戊醇抽提一次。加入等体积的 5mol/L的
LiCL;昆匀，冰浴，10min.。 7、。加入等体积的
异丙醇。室温10min。2500rpm离心10min。弃上清。8、加入倍体积3mol/L乙酸钠与2倍 体积・ 20C预冷无水乙醇 …20 C 20min。9、12000r/min室温离心5min。弃上清。将DNA溶于适量TE 中O
二，外周血DNA提取技术
分离外周血白细胞提取方法：试验步骤：1、取人肘静脉血5ml ,EDTA抗凝，2500rpm离心 10min。2、小心吸取上层血浆，分装到3个离心管中。3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液， 摇匀，冰浴15mino 4、2500rpm离心10min，弃上清。5、加入10ml溶血液，摇匀，冰浴 15min。 6、3000rpm离心10min，弃上清。7、倒置离心管，去掉残液。
8、得白细胞，一80 C冻存。试验要求： 血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过
2h，4C放置不超过5h，以防白细胞自溶。
三，***仿法抽提外周血白细胞基因组 DNA :
试验试剂：Ligsisbuffer : 133mM NH4CI ;最后加灭菌去离
子水至1000ml，高压灭菌。ACD抗凝剂： 柠檬酸柠檬酸钠葡萄糖；最后加灭菌
去离子水至350ml »高压灭菌。提取缓冲液(Extractio nbuffer ):
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10mMTrisCI （PH= （PH= （PH= （PH=%SDS1O% ;最后灭去离子水至100ml,高压灭菌 试验步
骤：1、在500讪抗凝血中加入ligsisbufferlOOO I充分颠混至清亮。以4000rpm，离心5min。弃上清 液。2、沉淀中加入ligsisbuffer1500 I,充分匀浆。以6000rpm，离心5min。 3、彻
底弃去上清，加入extractionbuffer500 I @裂解细胞），混