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文档介绍

文档介绍:酪啡肽功效学研究进展
酪啡肽的定义
酪啡肽又称酪蛋白吗啡、酪蛋白阿片肽、外啡肽,是酪蛋白在消化酶作用下释放的,能被机体直接吸收,具有多种生物学功能的乳源生物活性肽之一。是重要的乳源阿片肽。它具有行为调节及免疫调节作用,能抑制肠道运动,促进胰岛素分泌,对产乳及内源性器官发育生长因子有协同作用。
酪蛋白是乳中最重要的成分。乳源生物活性肽是酪蛋白在消化酶作用下释放的,能被机体直接吸收,具有多种生物学功能。其中酪啡肽是最重要的乳源生物活性肽之一。β-酪啡肽-7(beta-asomor-phin-7p)是从牛乳β-酪蛋白的酶解产物中分离出来的具有阿片活性的七肽物质,为β-酪蛋白第60 -66氨基酸残基片段。
β-酪啡肽的发现
1979年,Brantl等在豚鼠回肠纵肌肠肌中分离到一个牛乳酪蛋白的酶解产物,其是一个含有7个氨基酸残基的寡肽,命名为β-酪啡肽-7,序列为Tyr-Pro-Phe-Pro-Gly-Pro-lle,为牛β-酪蛋白第60-66位氨基酸残基片段,它具有很高的阿片活性,能够与u型阿片受体结合。后来人们又发现了β-酪啡肽-4、 β-酪啡肽-5、 β-酪啡肽-6、 β-酪啡肽-8、 β-酪啡肽-11。
β-酪啡肽的发现
β-酪啡肽的结构特征
牛β-酪啡肽是由牛β-酪蛋白分解产生的含有3-11个氨基酸的多肽,都是以牛β-酪蛋白的第60位的酪氨酸作为起始氨基酸;人的β-酪啡肽的结构和牛的非常相似,在N端都具有Tyr-Pro-Phe(酪氨、脯、苯丙)的序列。目前科学家发现了多种长度的β-酪啡肽,其主要包括β-CM-4,β-CM-5 ,β-CM-6,β-CM-7 ,β-CM-8和β-CM-11,研究表明:对于所有含有不同数量氨基酸残基的β-酪啡肽,在N-末端含有相同的氨基酸序列Tyr-Pro-Phe,这对于保持β一酪啡肽的生物活性是非常重要的。在酶促降解方面β一酪啡肽是非常稳定的,其能够抵抗多种蛋白酶(如胃蛋白酶和胰蛋白酶)的降解,这种特性与其肽链中富含脯氨酸有关。
β-酪啡肽-7的制备
人和动物乳被认为是最接近完美的食品,酪蛋白是乳中最主要的蛋白,占乳蛋白的80%左右。这些生物活性肽本身以非活性状态存在于蛋白质氨基酸序列之中,当在一定条件受蛋白酶作用下,可形成有活性的生物活性肽。β一酪啡肽-7是从牛乳β-酪蛋白的酶解物中分离出来的具有阿片活性的一个七肽物质。
β-酪啡肽-7的制备
一、酪蛋白酶解
方法:称取600mg酪蛋白,加双蒸水溶解,另加少量NaOH助溶;待酪蛋白充分溶解后加少量HC1,定容。称取胃蛋白酶,使酶与底物浓度之比为1:25;于37℃水浴保温,实验组保温时间分别作用60min, 90min, 120min, 150min;酶解结束后加入15%三氯乙酸终止反应,取上清,用NaOH调整pH至。
二、反相高效液相色谱(RP-HPLC)鉴定酪蛋白酶解产物中的β-CM-7
方法:
:取各时间点酪蛋白酶解液的上清液2m1,经微孔滤膜过滤,用于RP-HPLC分析。
,待运行结果显示稳定的基线时,分别取各时间点的20ul酪蛋白酶解上清液手工进样。
,流速,线性洗脱运行30min。
-CM-7标准品,制定标准峰。
:在待测样品中加入标准β-CM-7溶液,用以增强待测样品的分析结果。
三、葡聚糖凝胶 (Sephadex)G-15凝胶层析分离纯化酪蛋白酶解上清液
结果:120min酪蛋白酶解上清液,经葡聚糖凝胶G-15层析结果图,在215nm消光读数,绘制的洗脱曲线。收集不同组分洗脱液,按管号为6-19, 20-35, 36-50,51-73, 74-89, 90-120加以合并,得到6个组分。其中第六组分(箭头所指)中最有可能含有β-CM-7等小分子物质。
三、 β-酪啡肽-7的主要生理功能及研究进展
酪啡肽的主要生理功能:
(降低收缩力,抑制葡萄糖吸收等)
(促进免疫器官发育等)
(影响动物发情、排卵、性成熟等)
(增加高脂饲料采食等)
、镇静作用(作用同吗啡,镇静止痛、诱导睡眠)
(促进神经母细胞瘤神经细胞的生长)
(导致健忘症,抗焦虑)