文档介绍：- -
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实验一、血涂片的制备和染色
【原理】 将一小滴血液均匀涂在玻片上，呈单层严密分布，制成薄血片。用含天青B和伊红的Romannowsky类染料进展染色。细胞中的碱性物质如RBC中的血红蛋白及嗜酸性粒细胞胞质中的嗜酸性颗粒等与酸性染料伊红结合染成红色；细胞中的酸性物质如淋巴细胞胞质及嗜碱性粒细胞质中的嗜碱性颗粒等与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色；中性粒细胞的中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染成淡紫红色。
【器材】
1．载玻片 使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。
2．推片 选择边缘光滑的载玻片，在两角分别作斜线标记，然后用玻璃切割刀裁去两角，制成约15mm宽度的推片。
3．吸耳球。
4．显微镜。
5．酒精灯。
6．采血针。
7．注射器和针头。
【试剂】
1．瑞氏〔Wright〕染液
〔1〕Ⅰ液：、纯甲醇〔AR级以上)600ml、甘油15ml。将全部染料放入清洁枯燥的乳钵中，先加少量甲醇慢慢地研磨〔至少30min〕，以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的局部倒入干净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再参加少许甲醇细研，如此屡次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。再加15ml甘油密闭保存。
〔2〕Ⅱ液：磷酸盐缓冲液〔～〕，包含磷酸二氢钾〔KH2PO4〕、磷酸氢二钠〔Na2HPO4〕、蒸馏水加至1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口贮存。如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。
2．吉姆萨染液 、甘油35ml、甲醇65ml。将吉姆萨染料、甘油和甲醇放入含玻璃珠的容器内，每天混匀3次，连续4天，最后过滤备用。
3．瑞-吉复合染液
〔1〕I液：包含瑞氏染料1g、、甲醇500ml、中性甘油10ml。将瑞氏染料和吉姆萨染料置干净研钵中，加少量甲醇，研磨片刻，再吸出上液。如此连续几次，共用甲醇500ml。收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各摇3min，共5d，以后存放1周即能使用。
〔2〕Ⅱ液：即磷酸盐缓冲液〔～〕。、，加少量蒸馏水溶解，用磷酸盐调整pH，加水至1000ml。
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【操作】
1．采血
〔1〕静脉采血法：用EDTA·K2抗凝1～2h内的标本，使用玻棒、毛细管、注射针头等在距载玻片一端1cm处加1滴抗凝血，直径约4mm。
〔2〕皮肤采血法：选择第三、四手指，并先采红细胞、白细胞计数，再采血1滴置干净玻片上用于血涂片制备。
2．制作涂片 左手平执载玻片，或放在类似桌子等平坦地方，右手持推片从前方移动接近血滴，使血液沿推片边缘展开，将推片与载玻片呈30°～45°角，用均匀速度向前将血液推成厚薄适宜的血涂片，血涂片应呈舌状，头、体、尾三局部，且清晰可见。所有血液必须在推片到达末端前用完。推大于一片血片。贫血病人推片速度要快。
3．枯燥涂片
空气枯燥：迅速枯燥。
4．标记涂片 在载玻片的一端用记号笔编号，注明患者姓名或门诊/住院号。
5．染色
〔1〕瑞氏染色法：待血涂片干透后，用蜡笔在两端画线，以防染色时染液外溢。然后将玻片平置于染色架上，滴加染液〔I液〕3～5滴，使其迅速盖满血涂片，～1min后，滴加等量或稍多的缓冲液〔Ⅱ液〕，轻轻摇动玻片或用吸球对准血涂片吹气，使染液充分混合。5～10min后用流水冲去染液，