文档介绍：研究方法
本实验室方法
总结
汇报提纲
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腐殖酸等
去除
破 壁
预处理
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腐殖酸
CTAB
PVPP
PBS
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表面活性剂
强离子剂
玻璃珠法
超声波法
冻融法
低渗裂解、
微波裂解
颗粒破碎等
溶菌酶
蛋白酶
蜗牛酶
化学试剂法
酶解法
物理法
细胞破碎
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SDS 的高盐提取法
Edgcomb 改进法
Tsai 报道的方法
玻璃粉吸附法
方法
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1g土壤，研碎
ml DNA提取液，20μl蛋白酶k
20% SDS 65℃水浴2h
12000 r/min离心10min，取沉淀
20% SDS，涡旋 10s， 65℃水浴10min
收集上清，重复两次，合并上清，等体积苯酚:***仿:异戊醇25:24:1
15～20min颠倒几下
6000r/min10min离心
乙醇沉淀12000r/min10min，100μl无菌水溶解
SDS高盐提取法
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1g土壤，研碎
2mlPBS 37℃摇床
225r/min振荡30min
12000r/min
离心10min
溶液I， 溶菌酶， 37℃水浴2h，
2ml溶液II， -20℃冰浴， 65℃水浴循环三次
6000r/min离心10min，取上清，
等体积苯酚:***仿:异戊醇25:24:1抽提两次
12000r/min离心10min，100μl无菌水溶解
Tsai报道方法
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1g土壤，研碎
加5mol/LNaCL 270μl溶于的5mol/L CTAB270μl
乙醇沉淀， 12000r/min离心10min， 100μl无菌水溶解
2mlPBS
取上清液等体积苯酚:***仿:异戊醇25:24:1，抽提两次
2ml溶液II， 65℃水浴10min，将样品轻轻移至-20℃冰浴，65℃水浴三次
溶液Ⅰ， 溶菌酶，37℃水浴
12000r/min离心10min取沉淀
6000r/min离10min
Edgcomb改进法
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1g Sephadex G-200水化合
用含高盐的TE缓冲液洗5次,自然分离
用1ml无菌注射器紧贴洗涤器底部将悬浮液抽出注入
15ml的无菌螺帽塑料管中，不断离心(130×g,10min)
使颗粒塞紧管底直到形成的压实柱
100μl含高盐的TE缓冲液冲洗，离心(130×g,10min )
转移至新的无菌螺帽塑料管中
加入用玻璃粉匀化后的粗提取液100μl，
用100μl含高盐的TE缓冲液洗涤并离心(130×g,10min）
连续3次，丁醇分离出DNA
玻璃粉吸附法
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方法比较
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