文档介绍：标记免疫学分析技术发展历程
免疫荧光分析(Coons, 1941)
放射免疫分析(Berson和Yalow, 1960)
酶免ELISA (Engvall, 1971)
金标免疫分析(Faulk和Taylor, 1971)
化学发光免疫分析(Arakawa， 1977)
时间分辨荧光免疫分析(Soini和Hemmila，1979)
电化学发光免疫分析(Leland, 1990)
液相芯片(美国Luminex公司, 1997)
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①免疫荧光
②放射免疫
④化学发光
⑥电化学发光
⑤时间分辨荧光
③酶联免疫
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标记免疫技术的理论检测灵敏度
放射免疫 10-10-10-12 mol
酶联免疫 10-9-10-10 mol
化学发光 10-15 mol
时间分辨荧光 10-18 mol
电化学发光 10-18 mol
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一、时间分辨荧光免疫分析（TRFIA） （Time-resolved fluorescence immunoassay）
背景介绍
基本原理
技术特点
反应模式
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背景介绍
1979年，芬兰Wallac公司研发部的Soini 和 Hemmila首次提出了建立
稀土离子标记物的“时间分辨荧光免疫分析”理论
1983年，Soini 和 Kojola首先开发出以镧系元素为示踪物的时间分辨
荧光测量仪，建立了新的非放射性微量分析检测技术。同一年，
Pettersson等人运用此仪器首次对人绒膜促性腺激素 (hCG)进行了时间
分辨荧光免疫分析
1984年， Hemmila确定了DELFIA(Dissociation Enhanced Lanthanide
Fluoroimmunoassay)这种时间分辨免疫分析技术方案,从而使DELFIA成
为Wallac的专利技术
1988年，加拿大CyberFluor公司的Diamandis创立了一种不同于DELFIA
的时间分辨荧光免疫分析，即FIAgen
2003年，时间分辨荧光分析技术获国家科技进步二等奖
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基本原理
三价稀土离子包括有铕(Eu)，钐（Sm)，铽 (Tb) ，镝 (Dy)
等，它们的荧光光谱具有特异性强﹑ Stokes位移大﹑寿命长
的特点
DELFIA采用异硫***酸苄基二亚乙基三***四乙酸铕(DTTA-Eu)
为双功能螯合试剂，其一端螯合Eu3+，另一端可与蛋白质的-
NH2 连接。在中性或接近中性pH 条件下，DTTA 与Eu3+具
有足够的螯合稳定性，而在增强液（呈酸性）作用下，DTTA-
Eu 又能将螯合的Eu3+迅速、彻底地释放出来并与增强液中的
配体螯合﹑进入胶束的疏水内核，使Eu3+荧光得以成千万倍地
放大
FIAgen采用的是以Eu3+螯合物配基BCPDA为标记物，
通过检测其与过量Eu3+形成的螯合物荧光进行定量。由于
BCPDA 的可检测性不够理想，FIAgen 需要利用生物素-
亲合素信号放大来弥补BCPDA 检测灵敏度的不足
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DELFIA标记技术
碱性
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时间:(µs）
0
400
800
1000
340nm激发光
第二个循环
荧光
短寿命荧光
613nm长寿命荧光
延迟时间
测值时间
通过时间延迟，将特异性荧光与非特异性荧光
分辨开来，使理论本底达到0
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300
400
500
600
荧光强度
激发光
发射光
波长(nm)
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Tb
Dy
Eu
Sm
500
发射光强度
200
400
0
延迟时间(µs)
600
发射光波长(nm)
500
发射光强度
0
延迟时间(µs)
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