文档介绍：实验二总糖和还原糖的测定（二）
3,5二硝基水杨酸法
目的要求:
掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
实验原理:
在NaOH和丙三醇存在下，3,5 —二硝基水杨酸（DNS ）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的 NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在 540nm波长处有最大吸收, 在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
OH
NO 2
HOOC
+还原糖
HOOC
NO2
NO 2
(DNS)
（3 —氨基—5 —硝基水杨酸）？
试剂和器材
、试剂
3,5 —二硝基水杨酸（DNS ）试剂：称取 DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入 1000ml容量瓶中，加入 2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至 1000ml。
葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖 200mg,加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水
定容至100ml，即含葡萄糖为。
6mol/L HCl :取 250ml 浓 HCI （35% 〜38% ）用蒸馏水稀释到 500ml。
碘—碘化钾溶液：称取 5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH ：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
%酚酞指示剂。
二、材料
藕粉，玉米淀粉。
、器材
WFJ UV — 2000型分光光度计，水浴锅，电炉， 15mmK 180mm试管。
操作方法
一、葡萄糖标准曲线制作
取5支15mr^ 180mm试管，按下表加入。
AvV 口
吕号
葡萄糖标准液
/ml
蒸馏水
/ml
葡萄糖含量
/mg
OD540
0
0
1
0
1

2

3

4

5
1
0
2
在上述试管中分别加入，于沸水浴中加热 2min进行显色，取出后用流
动水迅速冷却，各加入蒸馏水，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。以
水代替葡萄糖标准液按同样显色操作为空白调零点。以葡萄糖含量（ mg）为横坐标，光吸
收值为纵坐标，绘制标准曲线。
二、样品中还原糖的提取
，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水（约2 ml）调成糊状，然后加入40ml蒸馏水，混匀，于 50 C恒温水浴中保温 20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在 50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。
三、样品总糖的水解及提取
，放在锥形瓶中，加入 6mol/L HCl 10ml ,蒸馏水15ml，在沸水
,取出1〜2滴置于白瓷板上，加 1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入 1滴酚酞指示剂，以 6N NaOH溶液中和
至溶液呈微红色，并定容到 100ml，