文档介绍：第四军医大学
硕士学位论文
Perlecan在大鼠牙囊发育过程中的表达及意义
姓名:陈磊
申请学位级别:硕士
专业:口腔临床医学(正畸)
指导教师:段银钟
20070501
独创性声明
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第四军医大学硕士学位论文
Perlecan 在大鼠牙囊发育过程中的表达及意义
硕士研究生:陈磊
导师:段银钟教授(主任医师)
第四军医大学口腔医学院正畸科,西安 710032
中文摘要
牙囊的发育是一个非常复杂的过程,从胚胎期一直延续到出生以后,
其间要经过开始发育、增殖、形态分化、基质沉积、成熟等阶段,最后才
能形成牙周组织[1]。牙囊的发育和分化与细胞外基质(extracellular matrix,
ECM)、生长因子和基底膜等因素非常密切。基底膜主要起支架作用,ECM
和生长因子附着于基底膜,生长因子作为诱导信号(inductivesignal)在上皮和
间充质之间的相互作用中起着重要作用。ECM在细胞的粘附、扩散及移行
方面意义深远。串珠素(perlecan)作为重要的ECM蛋白,由核心蛋白和 4 条
硫酸肝素(heperinsulfate, HS)侧链组成,与成纤维细胞生长因子(fibroblast
growth factor, FGF)等生长因子关系密切,在组织的发育过程中具有重要的
意义。因为其分子结构呈串珠状,1991 年Hassell等将其命名为perlecan。
Perlecan作为ECM中的主要蛋白聚糖之一,可以作为一种稳定基质结构和细
胞-基质相互作用的粘合剂,并介导生长因子信号对细胞增生和分化起作用,
显示出结合基底膜蛋白的活性。其在骨、血管等器官发育过程中的作用已
有报道。在牙囊发育过程中,perlecan是否有表达,还未见相关研究报道[2]。
本实验采用出生后 0 天、1 天、1 周、2 周的 SD 大鼠各 10 只,在腹腔
麻醉下取其下颌第一磨牙及其牙囊组织,并制作标本,运用免疫组化、灰
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度测量等方法,观察 perlecan 在牙囊各发育时间段的表达。结果显示,出
生后各时间组大鼠牙囊组织中 perlecan 均为阳性表达,主要分布在细胞周
围的基质中。出生 0 天,成釉器与牙乳头间的基底膜、内釉和外釉上皮呈
阳性表达,牙囊组织有阳性信号;出生 1 天,成釉器进一步发育,基底膜、
外釉、牙囊、牙乳头细胞均有阳性表达;出生 1 周,内釉上皮细胞开始分
化为成釉细胞,牙本质细胞尚未形成,成釉细胞、牙囊细胞呈阳性表达;
出生后 2 周,釉基质、牙本质已形成,牙囊组织开始形成牙骨质、牙槽骨,
成釉细胞呈阳性表达。
灰度测量结果采用重复测量的方差分析。分析结果表明,1 天组、1 周
组分别与 0 天组、2 周组有明显差别(P<);而 1 天组、1 周组之间无统
计学差异(P>);0 天、2 周之间无统计学差异(P>)。
运用荧光双标 perlecan 与碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblaast
geowth factor, bFGF),在激光扫描共聚焦显微镜(1aser scanning confocal
microscope, LSCM)下观察 perlecan 与 bFGF 在牙囊组织发育过程中的分布,
perlecan 与 bFGF 在大鼠牙囊发育过程中呈先后不同时相的表达,染色主要
为牙囊细胞(钟状晚期)及牙骨质牙槽骨内侧(硬组织形成期)。Perlecan
主要分布在