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他克莫司血药浓度方法学评论
他克莫司(tacrolimus,FK506)是一种新型强效免疫抑制剂,是链霉菌属中分离出来的发酵产物,常温下呈白色结晶状粉末,分子式为CH60N2HO,[1]。由于对T细胞有选择抑制作用,主要用于抗器官排斥性疾病肝、肾移植的急性排斥反应或是免疫性疾病类风湿性关节炎、红斑狼疮等疾病,药物本身和其代谢产物都具有一定的毒性,所以进行血药浓度监测是其使用的一个必备前提。目前监控其血药浓度的方法有许多,但是高效液相色谱法尚未成体系。本文采用反相高效液相色谱法测定他克莫司血药浓度[2],方法准确、可靠、简单,适用于临床上监测他克莫司的血药浓度的广泛推广。2011年2月～2011年6月,我们研究了使用反相高效液相色谱法测定他克莫司血药浓度的可行性。
1材料与方法

仪器与药品仪器:3200Qtrap型液相色谱一串联质谱仪;药品:他克莫司胶囊(规格为1mg/粒,浙江海正药业股份有限公司,批号:20100412);他克莫司对照品(上海同田生物技术有限公司批号:084120L);乙***为色谱纯,其它试剂为分析纯。

:色谱柱:DiamonsilC18柱(250mm××5μm);流动相:乙***:%磷酸:四氢呋喃(55:40:5);流速:;柱温:30℃;进样量:20。

:精密称取他克莫司10mg,全部转移至100ml容量瓶中,加入乙***至刻度摇匀,,放入冰箱保存。
:精密称取他克莫司对照品10mg,全部转移至l00ml容量瓶中,加入乙***至刻度,摇匀,。分别取标准品2、4、6、8、10ml,用乙晴稀释至20ml,做成标准曲线。
:,加入5ml***,振荡3min,3000r/min离心机处理10min,将上清液转移至另一管中,留待进样。
,每一浓度进样三次,如结果无太大偏差,取其平均值。以峰面积(A)对浓度(C)进行回归,~。
2结果

取空白血浆1ml,加入他克莫司标准液,、、,按“”项方法操作,测定样品峰面积,根据标准曲线计算相对回收率。根据各浓度血浆样品峰面积和相应浓度的标准液直接进样,测得的峰面积比较,通过计算得到绝对回收率。结果见表1。从表1可以看出:、、(μg/ml)三种梯度浓度的血浆样品,%、%、%;%、%、%。%,%。研究结果显示:反相高效液相色谱法能够较好测定他克莫司血药不同浓度的相对和绝对回收率。