文档介绍：山东农业大学
硕士学位论文
不同来源纤维肉瘤的鉴别诊断及人工致病试验
姓名:王鑫
申请学位级别:硕士
专业:预防兽医学
指导教师:崔治中
2011-06-06
山东农业大学硕士学位论文
中文摘要
禽白血病病毒(avian leukosis viruses,ALV)是一种反转录病毒,在鸡群中普遍存在,
可造成 1%~2%的成年鸡诱发内脏肿瘤并导致死亡。能感染鸡的可分为 A、B、C、D、E
和 J 等 6 个亚型,临床上常见 J和 A 亚型,E 亚型本身无致病性。过去十几年,ALV
病毒对肉用型鸡、蛋用型鸡和我国地方品系鸡的感染给养殖业造成了巨大经济损失。近
几年,鸡白血病/血管瘤病例的显著上升使该病成为危害我国蛋鸡业的主要疫病之一,并
在临床上发现纤维肉瘤的典型病例。本研究分别从临床商品代海兰褐蛋鸡和实验室致病
性试验 SPF 鸡中,获得两例表现典型纤维肉瘤的病例,分别进行了病毒分离鉴定及人工
致病性试验研究。
1 海兰褐蛋鸡急性纤维肉瘤的鉴别诊断及人工致病试验
2010 年 6 月,山东新泰某商品代海兰褐蛋鸡场,存栏 8000 只,90d 开始发病,至 240d
死亡率在 25%左右。其中有一只病鸡(29 号),在心脏后端,胸骨下缘有一肉瘤团。
本试验在此基础上,采集此肿瘤病料,进行病毒分离、鉴定并进行人工致病试验。
肿瘤组织的病毒分离及鉴定
获取的肿瘤病料研磨滤过液接种 DF-1 细胞,培养 5-7 d 后传代,加到有盖玻片的平皿中,
再继续培养 5-7 d,取细胞培养上清用禽白血病病毒 p27 抗原检测试剂盒检测 ALV p27
抗原,盖玻片上抗原阳性上清的细胞固定,分别用 JE9、11B154、H19 及用抗 ALV-A/B
gp85 的小鼠血清对盖玻片上的单层细胞分别做 IFA,表明肿瘤病料存在 ALV-J 的明显
的感染,可能存在 ALV-A/B 亚群的感染,但是不存在 MDV 和 REV 的感染。
肿瘤组织的病理组织学观察
肿瘤组织病理组织学显示均为纤维细胞样肉瘤,纤维排列凌乱,细胞大小不一。
肿瘤组织分离株的序列分析
ALV 分离株的前病毒基因组 DNA 中扩增包括部分 LTR 区和完整 env 基因的片段,
PCR 扩增产物经克隆、测序后,利用 DNAStar 软件对基因产物进行序列分析。
gp85 基因编码的氨基酸序列与其它参考株的比较
ALV 分离株的 gp85 基因编码的氨基酸序列与 11 株 ALV-J 亚群参考株的同源性均在
%以上,而与 ALV-A、B、C、D、E 亚群参考株的同源性仅在 %-%之间,
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不同来源纤维肉瘤的鉴别诊断及人工致病试验
进化树分析也显示分离株与 ALV-J 亚群参考株的同源关系最近。这表明分离株属于
ALV-J 亚群病毒。
gp37 基因编码的氨基酸序列与其它参考株的比较
此毒株的 gp37 编码的氨基酸序列与 J 亚型参考株的同源性在 %~%范围内,同
源性较高。与其他亚群的同源性在 %-%之间。
海兰褐鸡肿瘤组织的人工致病试验
肿瘤组织团块,加入 3 倍体积的 PBS 研磨,直至成匀浆液并用滤器过滤,得病料原液。
不同日龄海兰褐鸡的人工造病试验
病料原液,按颈部皮下和腹腔注射两种方法分别接种 1d,7d,14d,180d,240d 的海兰褐蛋鸡,
结果显示不同日龄的鸡在 2 种注射方式均能复制出肿瘤,仅是肿瘤出现的时间不同;1d、
14d 能在 10d 左右出现,180d 后在 20d 左右出现;但肿瘤的发生率和致死率均为 100%。
颈部皮下注射组除了引起颈部皮下肿瘤,还会引起胸腺和脾脏的萎缩,甚至是肝脏或者
脾脏的肉瘤或血管瘤;腹腔注射组除了在肌胃和肠系膜上看到明显的肿瘤结节外,有的
还可以引起肝脏和脾脏的肉瘤和血管瘤,但不能引起颈部皮下的肿瘤。
1 日龄海兰褐鸡颈部皮下注射组的肿瘤生长情况
1d 海兰褐鸡肿瘤的生长,在攻毒开始后一个星期内没有任何变化,生长至 9d,大部分
鸡可以在颈部皮下用手触摸到米粒大小的团块,随后几天肿瘤生长迅速,5d-6d 后直径
可达到 30 多毫米。
人工造病肿瘤组织的病毒分离鉴定及形态学观察
人工致病性试验生长出的肿瘤,按原始肿瘤组织的处理方法进行病毒的分离鉴定及肿瘤
组织的形态学观察。结果表明,人工致病性试验获得肿瘤存在 ALV-J 的明显的感染,可
能存在 ALV-A/B 亚群的感染,但是不存在 MDV 和 REV 的感染。肿瘤病料、触片,吉
姆萨染色和病理组织学观察看出,肿瘤细胞