文档介绍：河南大学
硕士学位论文
亚硝酸钠对SMMC-7721细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响
姓名:史齐
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:皇甫超申
2011-04
摘要
目的为了揭示环境亚硝酸盐暴露对癌细胞演进的影响,研究亚硝酸盐对人肝癌细
胞增殖、凋亡和侵袭能力的作用,评价环境亚硝酸盐暴露与肝癌的关系,为科学制订食
品、饮水亚硝酸盐健康标准,提供实验依据。
方法用人肝癌 SMMC-7721 细胞为模型,以亚硝酸钠代表亚硝酸盐,以硝酸钠为
对照,体外细胞增殖指标采用 MTT 细胞增殖活性、细胞计数、c-fos 早期增殖基因;细
胞凋亡模型采用氯化镉和乙醇诱导法,细胞凋亡检测采用流式细胞术 FITC-annexinⅤ/PI
双染法、Hoechst 33258 荧光单染法、Hoechst 33258/PI 活细胞联染法;细胞迁移和侵袭
能力判定采用划痕实验和 Transwell 侵袭实验。比色法测定脂质过氧化产物与抗过氧化
酶活性;免疫细胞化学法检测金属硫蛋白(MT)表达; Western-blotting 检测细胞凋亡
相关蛋白表达的变化。
结果 MTT 结果显示,亚硝酸钠浓度低于 800 mg·L-1 时,细胞增殖活力呈非线性浓
度依赖增殖关系,亚硝酸钠最小促增殖效应(超过对照组的 11%)浓度为 17 mg·L-1。用
一氧化氮(NO)特异性清除剂羧基-2-苯-4,4,5,5-四甲基咪唑-1-氧-3-氧化物(c-PTIO)
清除 NO 后,培养体系中的亚硝酸盐仍表现出一定的促细胞增殖作用。亚硝酸钠浓度高
于 800 mg·L-1 时,呈浓度依赖性增殖抑制。
亚硝酸钠浓度在 17-800 mg·L-1 时早期增殖基因 c-fos 表达量和细胞计数结果也呈现
出非线性浓度依赖增加关系。用 17 mg·L-1 亚硝酸钠建立亚硝酸盐短暂或慢性预适应细胞
模型,两种细胞模型在受到氯化镉或乙醇作用时,与单纯氯化镉或乙醇组细胞相比增殖
活力升高,细胞凋亡减少;同时细胞丙二醛(MDA)含量下降,超氧化物歧化酶(SOD)
和过氧化氢酶(CAT)活性升高,金属硫蛋白(MT)表达增强;Bax、Caspase-9、Caspase-3
蛋白表达量降低,Bcl-2 蛋白表达量升高,细胞缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor,
HIF-1α)表达量升高;低于 800 mg·L-1 的亚硝酸钠还可以明显诱导 HIF-1α表达增强,加
入一氧化氮清除剂 c-PTIO,细胞 HIF-1α表达虽有所减少,但在一定浓度范围内,仍然
促进细胞 HIF-1α表达增强; 17 mg·L-1 亚硝酸钠体外作用人肝癌 SMMC-7721 细胞 24 h,
可以使细胞划痕愈合的相对距离增大;亚硝酸钠孵育细胞 48h 后,培养液上清诱导 24 h,
可以使穿过人工基底膜的细胞数增多。
I
结论
1. 低剂量亚硝酸钠促进 SMMC-7721 细胞增殖,高剂量亚硝酸钠抑制细胞增殖。
2. 低剂量亚硝酸钠预适应,可以使 SMMC-7721 细胞抗氧化能力和 HIF-1α表达增
高,拮抗氯化镉和乙醇诱导的细胞线粒体途径凋亡。
3. 低剂量亚硝酸钠可以提高人肝癌SMMC-7721细胞的迁移能力。
4. 低剂量亚硝酸钠孵育人肝癌SMMC-7721细胞的上清液可以促进细胞侵袭能力。
关键词:亚硝酸钠,人肝癌 SMMC-7721 细胞,增殖,凋亡,侵袭
II
ABSTRACT
Objective In order to reveal the influence of sodium nitrite(NaNO2) in environment on tumor
progression and provide data support for institute the health standard of sodium nitrite in diet , the study is
to investigate the effects of sodium nitrite on the proliferation,apoptosis and invasion in SMMC-7721 cells
and evaluate the relationship between hepatoma and sodium nitrite in environment.
Methods Hum