文档介绍：能够在受体细胞内自我复制，或整合到染色体DNA上，随着 染色体DNA进行同步复制，并在宿主细胞内稳定保存。
有一个到多个限制酶切割位点，供外源DN***段插入其中。
具有特殊标记基因，供重组DNA的鉴定和选择(四环素抗性 基因，氨节青霉素抗性基因)。
四、DNA连接酶与DNA聚合酶
DNA连接酶
DNA聚合酶
连接DNA
双链
单链
连接部位
在两个DNA 片段之间形 成磷酸二酯 键
将单个核昔酸 加到已存在的 核酸片段的3, 端的耗基上，形 成磷酸二酯键
2基因工程的基本操作程序
一、目的基因的获取
1、方法：
从自然界中已有的物种中提取出来。
人工合成的基因：基因较小，核昔酸序列己知，通过DNA合
成仪或用化学方法直接人工合成。
从基因文库中获取目的基因：
基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DN***段导入受
体菌的群体中储存，各个受菌分别含有这种生物 的不同的基因。
部分基因文库(cDNA文库不含启动子)：只包含了一种生物的
一部分基因。
操作：根据目的基因有关信息(核昔酸序列，基因的功能、
基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA,以及 基因的表达产物蛋白质等特性)来获取。
高中新课标生物必修三知识点总结
专题一基因工程（基本原理：基因重组）
基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA 重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合 人们需要的新的生物类型和生物产品又叫做DNA重组技术。把外源基 因转入生物体内，能有效的打破物种界限，定向的改造生物的遗传性 状。
1 DNA重组技术的基本工具
-、“分子手术刀”
1、 名称：限制性核酸内切酶，又称限制酶。
2、 来源：从原核生物中分离纯化的（真核生物也有）。
3、 特点：识别双链DNA分子的某种特定核昔酸序列；并且有唯
一切点（指每一条链中特定部位的两个核昔酸之间的 磷酸二酯键）。
4、 识别序列大多数限制酶识别序列由6个核昔酸组成（ECORI、 Smal ）；也有少数酶的识别序列由4、5或8个核昔酸组成。
5、 片段末端：两种形式一一黏性末端和平末端。
二、 “分子缝合针”
1、 名称：DNA连接酶
2、 来源：从大肠杆菌中分离得到的，为E. coliDNA连接酶。
从T«噬菌体中分离得到的，为T,DNA连接酶。
3、 特点：恢复两核昔酸间的磷酸二酯键。
4、 区别：E. coli连接酶只连互补的黏性末端。TJNA连接酶可连
黏性末端又可连平末端。
三、 "分子运输车"
1、 载体：质粒（在天然质粒的基础上经过人工改造的）、人噬菌
体的衍生物、动植物病毒。
2、 质粒：细菌细胞内独立于拟核DNA之外，裸露的、结构简单
并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
3、 作为载体的条件：
复制原点：开始复制的地方。
三、将目的基因导入受体细胞
1、 转化：目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定
和表达的过程。
方法：
（1） 将目的基因导入植物细胞：
农杆菌转化法：
a能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，而对 大多数单子叶植物没有感染能力。
b转化：目的基因插入Ti质粒的T-DNA—进入农杆菌
-导入植物细胞f稳定维持和表达。
基因枪法（单子叶植物，成本高）。
花粉管通道法（普遍经济）。
（2） 将目的基因导入动物细胞：
方法：显微注射技术
操作程序：目的基因表达载体提纯取卵（受精卵）一
—-显微注射——胚胎早期发育一一 一新性状动物。
（3） 将目的基因导入微生物细胞
原核生物特点：繁殖快；多为单细胞；遗传物质相对
较少。
方法：
a用Ca2+处理细胞，使细胞变为感受态细胞（能吸收 周围环境中DNA分子的生理状态）。
b重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞 混合，在一定温度下促进细胞吸收DNA分子。
四、目的基因的检测与鉴定
1、 检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目的基因。
方法：DNA分子杂交技术，将转基因生物用放射性同位 素等作标记，以此作探针（基因探针是指用放射 性同位素或荧光分子等标记的单链DNA分子）， 使探针与其基因组DNA杂交，如果显示出杂交 带，就表明目的基因己插入染色体DNA中。
2、 检测目的基因是否转录出了 mRNA
方法：mRNA分子杂交技术，从转基因生物中提取的是mRNA,
特点：操作简便，但工作量大，具有一定的盲目性。
（4） 利用P C R技术（聚合酶链式反应）扩增目的基因：
原理：DN A双链复制的原理。
前提：要有一段已知目的基因的核昔酸序列，并根据这一序
列合成引物。
过程：a目的基因的DNA受