文档介绍：实验四阻断酶联免疫吸附试验(阻断 ELISA) 免疫标记技术 : 将抗原-抗体反应与标记技术相结合,用放射性同位素、酶或荧光素标记的已知抗体或抗原,通过检测标记物,间接测定未知的抗原或抗体。 : ?放射免疫测定法: 131I, 32P ?免疫荧光技术: FITC ,PE ?免疫酶测定法: HRP ,AP 免疫酶测定法( (E Enzyme nzyme I Immuno mmuno A Assay,EIA ssay,EIA ) ) ??用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。––辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶(HRP) (HRP) ,碱性磷酸酶,碱性磷酸酶(AP) (AP) ??特点: 特点: ??高度特异性:保持抗原抗体反应的特异性高度特异性:保持抗原抗体反应的特异性??高灵敏度:酶催化底物显色的高效性, 高灵敏度:酶催化底物显色的高效性, pg p***平微量检测水平微量检测??定性定量检测:反应液颜色深浅或光密度值定性定量检测:反应液颜色深浅或光密度值??分类: 分类: ??酶联免疫吸附试验:可溶性抗原或抗体酶联免疫吸附试验:可溶性抗原或抗体??酶免疫组化法: 酶免疫组化法: 组织中或细胞表面的抗原。组织中或细胞表面的抗原。酶联免疫吸附试验( (E E nzyme- nzyme- L L inked inked I I mmuno mmuno S S orbent orbent A A ssay, ELISA) ssay, ELISA) 用酶标记抗原或抗体检测液体(血液、细胞液) 中未知抗体或抗原的方法。 1. 2. (1)利用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接。(2)通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。–测定的对象可以是抗体也可以是抗原。 3. ??直接法( 直接法( direct ELISA direct ELISA ): ): ?将已知抗原直接吸附于载体,加酶标抗体?检测抗体??间接法( 间接法( Indirect ELISA Indirect ELISA ): ): ?将已知抗原吸附于固相载体,加酶标记二抗?检测液相中未知抗体??双抗体夹心法( 双抗体夹心法( Sandwich ELISA) Sandwich ELISA) : : ?将已知抗体吸附于固相载体,酶标记一抗?检测液相中的可溶性抗原??竞争法( 竞争法( Competitive ELISA) Competitive ELISA) : : ?将已知抗体或抗原吸附于固相载体,酶标记抗原或抗体?检测液相中的可溶性抗原或抗体??阻断法( 阻断法( Block ELISA) Block ELISA) : : ?将已知抗原吸附于固相载体,酶标记单克隆抗体?检测液相中的可溶性抗体( (1 1) )直接法测定抗原直接法测定抗原 A. ; 将抗原吸附在载体表面; B. ,形成抗原加酶标抗体,形成抗原——抗体复合物; 抗体复合物; C. C. 加底物。底物的降解量=抗原量。加底物。底物的降解量=抗原量。( (2 2)间接法测定)间接法测定抗体抗体 A. ; 吸附于固相载体表面; B. , , 形成抗原形成抗原- -抗体复合物抗体复合物; ; C. ; 加酶标抗体; D. D. 加底物。测定底物的降解量=抗体量。加底物。测定底物的降解量=抗体量。( (3 3) )双抗体双抗体夹心法测定夹心法测定抗原抗原 A. ; ; B. ,形成抗原加待检抗原,形成抗原- -抗体复合物抗体复合物; ; C. ; ; E. E. 加底物。底物的降解量=抗原量。加底物。底物的降解量=抗原量。( (4 4)竞争法测定抗原)竞争法测定抗原 A. ; ; B. B. 同时加入酶标抗原和待测抗原,竞争结合抗体; 同时加入酶标抗原和待测抗原,竞争结合抗体; 对照只加入酶标抗对照只加入酶标抗原; 原; C. C. 加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差=未知抗原量。加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差=未知抗原量。( (5 5)阻断法测定抗体)阻断法测定抗体本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎( 猪传染性胃肠炎( TGE TGE )、猪伪狂犬病( )、猪伪狂犬病( PR PR )及猪)及猪胸膜肺