文档介绍：血清白蛋白的分离、纯化与鉴定
1
实验目的
掌握血清白蛋白分离纯化的方法；
学会用盐析和离子交换柱层析法分离纯化蛋白质的原理与操作；
学****检测蛋白质纯度的方法.
2
原理与操作
血清的制备
粗白蛋白的分离
白蛋白的纯化
白蛋白纯度的检测
留样：2，3
留样：4,…
留样：1
3
一、猪血清白蛋白的初步分离
掌握血液样品的正确处理和制备方法,
掌握血清白蛋白粗分离的一般方法。
4
2. 实验内容：
采血 ；
血清分离；
盐析法分离血清白蛋白 ；
除盐
5
3. 实验原理
血清白蛋白是血浆中含量最丰富的蛋白质，约占总量的60％。
它是一种水溶性很强的蛋白，结构稳定，能结合多种小分子，如脂肪酸，胆红素，血红素等，起维持血液的正常渗透压作用。
此外白蛋白还有解毒、参与脂类代谢及血浆中微溶物质的运输、维持血液酸碱平衡等作用，在医学临床及生物领域应用广泛
6
不同蛋白质的相对分子质量、溶解度以及在一定条件下带电的情况有所不同，可根据这些性质的差别，分离及提纯各种蛋白质。
本实验先用盐析法作初步分离。
盐析就是大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程。在高浓度的中性盐影响下，蛋白质分子的水化膜被剥夺,蛋白质分子所带的电荷被中和破坏了蛋白质溶胶的稳定因素，使蛋白质沉淀析出。
中性盐并不破坏蛋白质的分子结构和性质，因此，若除去中性盐或减低盐的浓度，蛋白质就会重新溶解。
7
在半饱和硫酸铵溶液中，血清白蛋白不沉淀，球蛋白沉淀，离心后白蛋白主要在上清液中。由于血清白蛋白的相对分子质量较硫酸铵大得多，故盐析初步分离的白蛋白可用透析法或凝胶层析法除去硫酸铵。
8
奈氏反应
奈氏试剂是络盐K2[HgI4]加KOH的溶液，在无机化学定性分析中，用其检验氨或铵盐
砖红色的溶液或沉淀
9
4. 实验操作：
（1）收集血清：取2 ml血液，4 ℃，3,000 rpm离心15 min，用移液枪吸取上清（血清）1 ml至10 ml离心管， ml （样1） mL离心管，用于测定蛋白质含量和电泳；
（2）量筒量取9 ml底液，用移液管逐滴加入，在加的过程中需不断的摇晃或振荡，4 ℃静置2 h；（底液为50 %的饱和硫酸铵溶液）；
（3）4 ℃，3,000 rpm离心15 min，收集上清， ml （样2）离心管，用于测定蛋白质含量和电泳；
（4）用5%（7-9滴，白蛋白的等电点），用量筒确定上清液的体积，计算加入饱和硫酸铵（pH＝）的体积（×V）；
10