文档介绍：蛋白质的定性定量分析
第二章
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蛋白质的含量测定
凯氏定氮法：1883年丹麦化学家Kjeldhl建立，经后人改良后形成的一种定量测定蛋白质最为精确、敏感的方法。
原理：蛋白质的含氮量为16％，只要测出样品中氮的含量，即可计算出蛋白质的含量
样品中蛋白质的含量＝N×
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凯氏定氮的基本流程：
1、消化：生物样品与浓硫酸共煮，样品蛋白质被无机化，其中氮元素转变为硫酸铵。
Pr＋H2SO4 CO2＋H2O＋(NH4)2SO4
(NH4)2SO4+2NaOH NH4OH+H2SO4
NH4OH+HCl NH4Cl+H2O
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凯氏法的评价：
优点：
缺点：
1、适用于一切形态的样品；
2、不用比色，对混浊不透明的样品也可进行分析；
3、结果的精、准度较高。
1、样品中含有非蛋白态氮时影响分析结果；
2、组成蛋白质的氨基酸可影响分析结果；
3、操作复杂，对操作者的要求高。
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Lowry法
Lowry法原理：是在双缩脲法和Folin酚法的基础上建立的一种新的蛋白质定量方法。蛋白质在碱性条件下与铜离子反应生成紫红色络合物。然后再与Folin试剂反应生物深蓝色。颜色与蛋白质含量成正比，符合朗伯－比尔定律。
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方法评价
优点
1、可对多个样品同时进行分析，操作简便；
2、结合Folin酚法，提高了分析的灵敏度；
3、结合双缩脲法，避免了Folin酚法的局限。
缺点
1、比色测定，要求显色后溶液透明，且样品必需可溶；
2、酚方式剂在碱性溶液中稳定性差，显色后需尽快比色；
3、干扰反应的因素较多。
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0 mg/ml
A
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