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细胞计数板使用方法计划.docx

上传人:春天资料屋 2021/9/13 文件大小:113 KB

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文档介绍

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细胞计数板使用方法
实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时, 通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。具体操作:
将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。
将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置 3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。
计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算:细胞数 /mL=四大格细胞总数 /4 × 104
说明:公式中除以 4,因为计数了 4 个大格的细胞数。
公式中乘以 104 因为计数板中每一个大格的体积为:
(长)× (宽)× (高) = 而 1ml=1000mm3
(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团, 应按单个细胞计算, 若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液)
细胞计数板的使用
血球计数板 - 基本构造
血球计数板是一块特制的厚型载玻片, 载玻片上有四个槽构成三个平台。 中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,
每个方格网共分九个大格, 中央的一大格作为计数用, 称为计数区。 计数区的刻度有两种:一种是计数区分为 16 个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成 25 个小方格;另一种是一个计数区分成 25 个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成 16 个小方格。但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由 400 个小方格组成。
1 专业技术分享
可编辑可修改
计数区边长为 1mm,则计数区的面积为
2
2
1mm,每个小方格的面积为
1/400mm。盖
3
上盖玻片后,计数区的高度为 ,所以每个计数区的体积为 ,每个小
3
方格的体积为 1/4000mm。
使用细胞计数板计数时, 先要测定每个小方格中微生物的数量, 再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。
细胞计数板 - 使用方法
1.视待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释(斜面一般稀释 100 倍),以每小格
的菌数可数为度。
2.取洁净的细胞计数板一块,在计数区上盖上一块盖玻片。
3.将菌悬液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴(不宜过多),让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,勿使气泡产生, 并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。 也可以将菌悬液直接滴加在计数区上 (不要使计数区两边平台沾上菌悬液, 以免加盖盖玻片后, 造成计数区深度的升高),然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。
4.