文档介绍：实验一植物的组织培养
实验原理
植物组织培养是指植物的任何器官、组织或细胞,在人工预知的控制条件下,放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中,使其生长、分化并形成完整植株的过程。其理论依据是植物细胞具有全能性。
组织培养的特点是:取材少,培养材料经济;人为控制培养条件,不受自然条件影响;生长周期短,繁殖率高;管理方便,利于自动化控制。组织培养不但是进行细胞学、遗传学、育种学、生物化学和药物学等学科研究的重要手段;而且在农学、园艺、林业和次生代谢产物工程等生产领域得到广泛的应用。
培养基是植物组织培养中的主要部分,除了培养材料本身因素外,培养基的种类和成分等直接影响培养材料的生长和发育,应根据培养材料的种类和培养部位选择适宜的培养基。培养基的种类很多,不同的培养基有其不同的特点。
培养基的主要成分:
水
无机成分:
无机大量元素氮: 铵态氮、硝态氮混合
磷: 磷酸盐
钾: 钾盐
钙、硫、镁
无机微量元素
主要有:铁、硼、锰、锌、铜、钼、钴、***
有机成分:
糖、维生素、肌醇、氨基酸及有机附加物。
植物生长调节物质:
生长素类:NAA、IAA、IBA、2,4-D
细胞分裂素类:BAP, KT,TDz,ZT
其他类: GA3, ABA, PP333
琼脂
pH值
配制培养基最方便的方法是预先配制不同组分的培养基母液,贮藏在冰箱,待配制培养基时取出,按比例稀释。
配制母液时为了减少工作量可以把几种药品配在同一母液中,但是应该注意各种化合物的组合以及加入的前后顺序,应该把钙离子、锰离子、钡离子和硫酸根和磷酸根例子错开,以免发生沉淀。
把每种试剂单独溶解后再加入后一种化合物。混合已溶解的各种矿质盐时还应该注意加样顺序。
铁盐单独配制, 的硫酸亚铁(Fe )***四乙酸二钠(Na2-EDTA)溶于1L水中,用时每配1L培养基,取该溶液5ml。
IAA 、IBA、NAA等可用少量的乙醇溶解,然后在加水定容。2,4-D可用1 N的Na OH 溶解然后再定容; KT和6-BA应先定容于少量的1 mol/L 的HCl中,再加水定容。玉米素应该溶于95% 的乙醇中再定容。
pH值对培养基的凝固情况和植物材料的生长有很大的影响,因此,等培养基配好后,应该立即调整培养基的pH ,最好用酸度计,既快又准。培养基配好后应该立即分装,体积一般为容器的 1/4 或者1/3为好。
器材和药品
高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、循环水式真空泵、电子天平、酸度测定仪、光照培养箱,搪瓷杯、搪瓷盘、100 ml三角烧瓶(12个/组)、250 ml三角瓶(2个/组)、试剂瓶、解剖刀柄与刀片、单面刀片、剪刀、长镊子、培养皿、移液管、漏斗、量筒、烧杯(50、100、500、1000 m1),酒精灯、火柴、玻璃棒、吸耳球、封口薄膜、牛皮纸、线绳、牛皮筋、脱脂棉、滤纸、pH试纸(-)、标签纸、称量纸、药勺等。
次***酸钠消毒液, 75%的酒精,%的升***溶液.
1 N 盐酸,1 N NaOH,%的琼脂,3%的蔗糖.
mg/ml的2,4-D溶液:取25 mg的 2,4-D,加入少量95%的酒精和1 N的NaOH溶解,再加蒸馏水定容至250 ml。
mg/ml 的6-BA溶液:取25 mg的6-BA,用少量1 N的盐酸溶解,再加蒸馏水定容至250 ml。
MS培养基储备液的配制
实实验步骤
P培养基的配制
: 按照表 1分别配制,并在4 ℃冰箱中保存。
22.  植物激素配制:称取10 mg NAA,加入少量酒精,并加水定容50 ml ( mg/ml), 用同样的方法配制2,4-D母液。称取 50 mg 6-BA, 加少量的1 mol/L HCl,使其充分溶解,然后加水至50 ml (浓度为1 mg/ml) 。
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