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附录：常用试剂配制及应用
一、常用缓冲液、试剂的配制
碳酸盐缓冲液（Carbonate-Bicarbonate Buffer）
由于碳酸盐pH值偏碱，因此，常用于pH>9的缓冲液配制（附表1）
mol/L 碳酸盐缓冲液（〜）
pH

NaCO
(ml)
NaHCO (ml)
pH

NaCO
(ml)

NaHCO
(ml)

磷酸缓冲液(Phosphate Buffers , PB)
磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个 pKa值, 所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽。NaHPO4 pKa1= ，pKa2= ; N&HPO4 pKa仁，pKa2= 。
另外，磷酸盐还有钾盐分子形式，一般来说，低温时钠盐难溶，钾盐易溶，因此，配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂，但若配制十二烷基硫酸钠（SDS -聚丙烯酰***凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠盐而不能用钾盐，因为 SDS会与磷
酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。
磷酸缓冲液的优点为：①可配制成不同离子强度的缓冲液；②适用 pH缓冲范围较宽；③受温度影响缓冲液pH值变化较小；④离子强度对缓冲液pH影响较小， 0
磷酸缓冲液的缺点是：①磷酸盐易与钙离子（CsT）、镁离子（Mg+）及重金属离子结合生成不溶的沉淀物；②可能干扰某些生物化学反应过程，如对某些酶的催化活性具有一定程度的抑制作用。
NaHPQ的pH值偏酸性，可用作pH<4的缓冲液。
NaHPO的pH值偏碱性，可用作pH>10的缓冲液。
而pH= 6〜8的中性缓冲液是更常用的缓冲液，需要NaHPQ与NaHPQ两种磷酸盐混合配制（附表2）。
附表2. mol/L 磷酸盐缓冲液（〜）
pH

NaHPO (ml)

NqH pq (ml)
pH

NaHPQ (ml)

NqH PQ (ml)

磷酸盐缓冲溶液(Phosphate-buffered saline, PBS)
磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加 NaCI以维持溶液的渗透压，因此,
PBS适用于做细胞缓冲液，常用PBS配制如下。
NaCl
8g
KCl

NaHPQ

KHPQ

在800ml蒸馏水中溶解，〜
1L, 15psi ( )高压灭菌20min,室温保存备用。
Tris 缓冲液(Tris-HCI Buffer, TB )
Tris