文档介绍：Chapter 3 Separate and investigate target gene e to ic Engineering By Nieguangjun E-mail:@ ?从哪儿提取( Where )? ?怎么提取( How )? ?提到什么程度( What )? ?会出现什么问题( Questions ) ?如何解决( Solution )? ?主要内容?核酸提取的原则和基本要求 Principle and steps ? Principle ?保持核酸的完整性; ?提高核酸的质量(纯度和浓度)。? Requirements for purification ?不存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子; ?其他事物大分子( Pr、 sugar and lipid ) ?其他核酸污染?核酸提取的一般过程 Principle and steps ? Steps ?样品准备(取材) ?破细胞(物理法、化学法、酶法); ?除杂质(蛋白质、脂类、糖类和不需要的核酸); ?沉淀提纯? ? - 内容物释放? III. 核酸分离、纯化? IV. 沉淀或吸附核酸,并去除杂质?? -方法?机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法; ?化学试剂法:用 SDS 或 CTAB 处理细胞; ?酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎。破碎细胞-来源?动物:小牛胸腺?动物肝脏、血液和肌肉组织等?鱼类精子; ?植物:种子的胚中都含有丰富的 DNA 。?微生物:谷氨酸菌体含 7%~10% ,面包酵母含 4% ,啤酒酵母含 6% ,大肠肝菌含 9%~10% (培养过夜)。? Note :从各种材料中提取 DNA 方法不同,分离提取的难易程度也不同。对于低等生物。如从病毒中提取 DNA 比较容易,多数病毒 DNA 分子量较小,提取时易保持其结构完整性。从高等动植物中提取 DNA 难度大一些。因分子量较大,易被机械张力剪断。破碎细胞(来源-方法) ?微生物:溶菌酶、 SDS 裂解。?高等植物:捣碎器破碎、液氮研磨。?酶法:蛋白酶,如胰蛋白酶, ?冰冻法:反复冻融或液氮冻后组织捣碎。?动物:液氮处理后用匀浆器破碎。?细胞器 DNA :首先纯化细胞器。??以上处理时均要同时加入核酸酶抑制剂