文档介绍：醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白
【实验原理】
由于各种血清蛋白质的等电点不同，因此在pH ，各种血清蛋白质所带电荷量不同，同时由于它们的相对分子质量也不同，造成电泳迁移率不同，所以在醋酸纤维薄膜上电泳后，可将各种血清蛋白质分离开。
血清中含有清蛋白，α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、分子量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。分子量小、等电点低、在相同碱性PH值缓冲体系中，带负荷电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快。
例如，以醋酸纤维素薄膜为支持物，，染色后可显示5条区带。清蛋白泳动最快，其余依次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白（如图3-5）。
图3-5正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图
1为清蛋白，2，3，4，5分别α1-，α2-，β-及
γ-球蛋白，6为点样原点
这些区带经洗脱后可用分光光度法定量，也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。
此法由于操作简单，快速，分辨率高及重复性好等优点。它不仅可用于分离血清蛋白，还可用于分离脂蛋白、血红蛋白及同工酶的分离测定。
【实验材料】
1．电泳仪 包括直流电源整流器和电泳槽两个部分。
2．醋酸纤维素薄膜。
⑵ 试剂
4 试剂
① 巴比妥-巴比妥钠缓冲液(, , )（AR）（AR），置于三角烧瓶中，加蒸馏水约600mL，稍加热溶解，冷却后用蒸馏水定容至1000mL。置40C保存，备用。
② 血清蛋白染色
染色液（%氨基黑10B）：，加蒸馏水40mL，甲醇（AR）50mL，冰乙酸（AR）10mL，混匀溶解后置具寒试剂瓶内贮存。
漂洗液：取95%乙醇（AR）45mL，冰乙酸（AR）5mL和蒸馏水50mL，混匀置具塞试剂瓶中贮存。
③透明液：临用前配制。
甲液：取冰乙酸（AR）15mL，无水乙醇（AR）85mL，混匀置试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
乙液：取冰乙酸（AR）25mL，无水乙醇（AR）75mL，混匀置试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
④保存液：液体石蜡。
⑤定量洗脱液（ NaOH溶液）：
称取16g氢氧化钠（AR）用少量蒸馏水溶解后定容至1000ml。
【 实验方法与步骤】
4 实验方法与步骤 ⑴ 仪器与薄膜的准备
1、仪器与薄膜的准备
① 醋酸纤维素薄膜的润湿与选择
用竹夹子取一片薄膜，小心地平放在盛有缓冲液的平皿中，若漂浮于液面的薄膜在15-30s内迅速润湿，整条薄膜色泽深浅一致，则此膜均匀可用于电泳；若薄膜润湿缓慢，色泽深浅不一或有条纹及斑点等，则表示薄膜厚薄不均匀应弃去，以免影响电泳结果。
将选好的薄膜用竹子轻压，使其完全浸泡于缓冲液中约30min后，方可用于电泳。
② 电泳槽的准备
根据电泳槽膜支架的宽度，剪裁尺寸合适的滤纸条。
在两个电极槽中，各倒入等体积的电极缓冲液，在电泳槽的两个膜支架上，各放两层滤纸条，使滤纸一端的长边与支架前沿对齐，另一端浸入电极缓冲液内。当滤纸条全部润湿后，用玻璃棒轻轻挤压在膜支架上的滤纸以驱赶气泡，使滤纸的一端能紧贴在膜支架上。
滤纸条是两个电极槽联系醋酸纤维素薄膜的桥梁，因而称为滤纸桥。
③ 电极槽的平衡
用平衡装置（或自制平衡管）连接两个电泳槽，使两个电极槽内的缓冲液彼此处于同一水平状态，一般需平衡15-20min。注意，取出平衡装置时应将活塞关紧。