文档介绍：Ellman试剂
介绍、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、1页
半胱氨酸作为巯基基团的标准品、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、2页
巯基基团的摩尔吸光度、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、2页
故障排除、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、3页
相关的赛默飞世尔科技产品、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、3页
附加信息、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、4页
参考文献、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、4页
半胱氨酸作为巯基基团的标准品
原料制备
·反应缓冲液：，PH=，包含1mM EDTA
·
·Ellman试剂溶液：1mL反应缓冲液溶解4mgDTNB
1、在缓冲液中溶解一系列不同浓度的半胱氨酸：
标准品
缓冲液体积
半胱氨酸质量
最终浓度
A
100ml
mM
B
5ml
25ml标准品A
C
10ml
20ml标准品A
D
15ml
15ml标准品A
E
20ml
10ml标准品A
F
25ml
5ml标准品A
G
30ml
0ml
取若干试管，。
在各试管中加入250μL各浓度的标准工作液或待测物溶液。
注：对于未知的样品需要稀释，以便使其浓度标准曲线的工作范围之内（理想的浓度为
-）。
室温下反应15min。
测试412nm紫外吸收。
根据得到数值生成一个标准曲线，测定待测样品由标准曲线计算SH含量
基于摩尔吸光系数精确测量巯基的基团
·反应缓冲液：，PH=，包含1mM EDTA
·Ellman试剂溶液：1mL反应缓冲液溶解4mgDTNB
对于每一个未知样本进行测试,。
加入250μL待测样品,空白添加250μL反应缓冲液。
3、室温下反应15min。
4、测试412nm紫外吸收。
5、根据TNB的摩尔消光系数(14,150M-1cm-1)计算巯基含量。
自由巯基浓度的计算示例