文档介绍：实验七鸡马立克氏病的琼扩试验
(一)实验目的
熟悉鸡马立克氏病的诊断方法和免疫接种要点。
掌握利用琼脂扩散试验诊断鸡马立克氏病
(二)实验原理
主要采用双向双扩散试验,即用已知抗原、阳性血清和待检血清在琼脂凝胶中进行免疫双扩散,室温下作用24小时,当已知扩原和阳性血清间出现明显沉淀线,扩原和待检血清间也出现沉淀线且与阳性血清沉淀线相连,表明待检血清中有相应抗体。此方法也常用于法氏囊血清和小鹅瘟血清抗体的检测。
(三)实验准备
用具:打孔器、16#针头、剪刀、镊子、酒精灯、打孔纸样、记号笔、洁净平皿。
(四)实验步骤
(1) 1%琼脂糖平板制备 1%琼脂粉+8%Nacl加蒸溜水,水浴加温使充分溶化后,加入培养皿,每皿约20ml;平置,在室温下凝固冷却后,将琼脂板放在预先印好的7孔形图案上,用打孔器按图形准确位置打孔,中央孔孔径为4mm,周边孔孔径为3mm,孔距均为3mm。
(2) 检测血清抗体(被检鸡血清) 向中央孔滴加标准琼扩抗原,向周边孔滴加待检血清和至少有一孔加阳性血清,均以加满而不溢出为度;将加样后的琼脂平皿加盖后平放于加盖的湿盒内,置37℃温箱中孵育,8~24h内观察并记录结果。
(3) 检测羽髓中MDV抗原向中央孔加MD阻性血清,向周边1、4孔加标准:MD琼扩抗原,向周边2、、5、6孔加待检羽髓浸液(加1~2滴蒸馏水在试管内挤压),或直接插羽髓。加样后将琼脂平皿置湿盒内,于37℃温箱孵育,8~24h内观察结果
(五)结果分析
1、被检样品孔与中心孔之间形成清晰的沉淀线,并与周边已知抗原或阳性血清孔的沉淀线互相融合者,判为阳性,不出现沉淀性的判为阴性;
2、