文档介绍：实验二巴氏杆菌病的实验室诊断
(一)实验目的
初步掌握巴氏杆菌病的微生物学诊断步骤和方法。
了解巴氏杆菌病的病理变化。
(二)实验准备
染色液:美兰染色液、瑞氏染色液、革兰氏染色液(草酸铵结晶紫、革兰氏碘液、95%酒精、沙黄水溶液)、
用具:搪瓷盘、碘酊棉、75%酒精棉、组织镊、手术刀(带柄)、普通剪刀、塑料洗瓶、纱布、酒精灯、载玻片、吸水纸(载玻片大小)、铂耳、显微镜、擦镜纸、染色废液缸、甲苯、镜油、血培养基平板、巴氏杆菌病死鸡
(三)实验步骤
1、分离培养(划线培养)
①无菌解剖病死鸡暴露胸腹腔,露出其心、肝、肺等。
②用火焰灼烧手术刀片,烫肝脏表面,并迅速划小口。
③用无菌铂耳钩取肝组织,划线分离于血琼脂平板上,37℃/24hr培养后,观察菌落形态。
2、触片制作
①肝组织触片(美兰染色)
取一小块肝组织,并用吸水纸吸一下,在洁净的载玻片上轻轻地作2~3个压迹制成肝触———→固定后,滴加适量美兰染色液———→水洗——→吸干或自然干燥。
②心血涂片(瑞氏染色)
用无菌铂耳钩取2-3铂耳心血于洁净载玻片上,均匀涂成直径
约1cm2的涂面,制成心血涂片后———→盖上一块玻片大小清洁滤纸片在其上轻轻滴加瑞氏染色液,至略浸过滤纸并保持湿润
加等量蒸馏水掀去滤纸片直接用自来水冲洗吸干或自然干燥。
③革兰氏染色(纯培养)
在洁净载玻片上醮取三铂耳生理盐水,用灭菌铂耳勾取少许细菌,并在生理盐水上涂成1cm2涂面在干燥固定好的涂片上
水洗水洗水洗
水洗吸干或自然干燥。
3、仔细观察病死鸡的病理变化(心、