文档介绍：大肠杆菌
一、细菌培养与鉴定
1．别离培养
早期培养对确定病原有重要意义。
培养的对象首先是急性血性腹泻患者，其次是HUS、TTP等住院病人，再其次是高危接触者。
培养基：
山梨醇麦康凯琼脂、胰胨大豆琼脂
改进的伊红美兰 、改进的SD-39〔MSD〕琼脂
添加了头孢克肟 和 亚碲酸钾的山梨醇麦康凯琼脂〔TC-SMAC〕
添加了头孢克肟和鼠李糖〔%)的山梨醇麦康凯琼脂〔CR-SMAC〕
“科玛嘉〞大肠杆菌O157: H7显色培养基
四溴荧光亚***兰琼脂
H7抗血清—山梨醇发酵培养基
增菌液：
含10mg/L 新生霉素的EB肉汤或肠道增菌液
含10mg/L 新生霉素或10mg/L盐酸-吖啶黄的胰蛋白胨大豆肉汤
新生霉素MEC肉汤
月桂基胰蛋白胨肉汤
参加下例任何一种抑制剂均可增加培养基的选择性
头孢克肟mg/L mg/L
新生霉素10mg/L 万古霉素40mg/L
2．免疫磁珠别离法
免疫磁珠别离法是将特异性抗体吸附于一种能被吸附的磁性珠子上,然后利用抗原抗体反响特性将样品中的大肠杆菌O157: H7富集起来。
ml加大肠杆菌O157: H7免疫磁珠20ul;,重复3-5过程;,划线接种于CT-山梨醇麦康凯琼脂(C-头孢克肟,T-亚碲酸钾)等选择性培养基。37℃培养6-24小时，挑取可疑菌落进行鉴定。
Chapman等 共检测大便标本690份, 免疫磁珠别离法检出25 。用免疫磁珠别离法别离的l2株大肠杆菌O157: H7中,直接培养阳性仅5株。
Wright等将接种大肠杆菌O157: H7的碎牛肉标本置加有万古霉素和头孢克肟的缓冲蛋白胨水培养,然后直接或用大肠杆菌O157抗体包被的磁珠别离细菌后,接种于CT-SMAC,结果直接次培养检出量为200cfu/g,而免疫磁珠别离法仅需 2cfu/g 。
Chapman等先用EC肉汤增菌,然后用免疫磁珠别离法富集牛粪便大肠杆菌O157: H7菌株,再用选择性培养基别离，并与CR-SMAC和CT-MAC直接培养作比较。用前者检测接种12株不同大肠杆菌O157: H7菌株的牛粪便悬液,其敏感性比在两种培养基上直接培养高100倍。
Cubbon等用免疫磁别离法〔IMS〕检测牛粪便和食品标本的大肠杆菌O157: H7。在一起经牛奶传播的大肠杆菌O157: H7爆发中,用IMS、粪便培养和多聚酶链反响(PCR)检测Vero***基因的携带,用三种方法对粪便大肠杆菌O157: H7的别离率作比较结果,在受检的142份粪便标本中,直接培养和IMS均阳性20 份,另13份仅IMS阳性。因此,IMS提高了大肠杆菌O157: H7感染病例的检出率,与PCR符合率高。
目前，污染的肉、家畜，甚至饮用水均面临大肠杆菌O157: H7的卫生威胁。检测食品和水源中肠道病原体使用传统的培养法,结果不理想。IMS和其它检测的研究说明,对快速检测食品和环境标本似乎前景良好,Yu检等以IMS结合电化学发光检测法(ECL)检测食品和污染物中的大肠杆菌。结果显示,在原缓冲液检出大肠肠菌的范固为100－1000 cfu/lm,在食品检出的范围为1000－2000cfu/lm ，检测时间十分快,一般不到1小时。菌O157: H7菌株的牛粪便悬液,其敏感性比在两种培养基上直接培养高100倍。在监测牛群的4个月间,从牛采集1024份直肠标本,其中检出大肠杆菌O157: H784份〔%〕84份中有23份〔%〕由直接培养和IMS别离。23份中15份由两种培养基、5份仅由CT-SMAC、3份仅由CR－SMAC别离,其余61份(%)仅IMS别离。用含吐温－20 的PBS洗涤磁珠可减少其它微生物与磁珠的非特异性结合。用无关的抗体包被磁,那么大肠杆菌O157: H7不结合。IMS具有快速、操作简单、特异性高,在流行病学调查中有价值。
3．生化反响
目前许多国家使用的O157和 H7特异性抗体与极少数细菌具有不同程度交叉反响。因此用生化试验确定为大肠杆菌是必须的。
典型大肠杆菌的主要生化反响结果如下：
动力试验〔+〕 葡萄糖〔+〕 麦芽糖〔+〕甘露醇〔+〕 蔗糖〔－/+〕 硫化氢〔－〕 尿素〔－〕 靛基质〔+〕 ***红〔+〕 V-P试验〔－〕枸橼酸盐〔－〕苯丙氨酸脱羧酶〔－〕赖氨酸脱羧酶〔+/－〕鸟氨酸脱羧酶〔 +/ －〕氧化酶〔－〕***化钾〔－〕
与O157有鉴别意义的生化反响见表1。
MUG即4-***伞形化内酯-β-葡萄糖醛酸苷。大多数大肠杆菌具有葡萄糖醛酸酶,可水解MUG产生荧光, 但O157: H7中大多数菌株那么不水解MUG。Thompson