文档介绍：病原微生物检测方法
2021/3/11
一，生物化学方法
原理：生化方法检测病原微生物实际上是测定微生物特异性酶。由于各种微生物所具有的系统不完全相同 ,对许多物质的分解能力亦不一致。因此可利用不同底物产生的不同代谢产物来间接检测该微生物内酶的有无 ,从而达到检测特定微生物的目的。
辛酯酶法：快速检测沙门氏菌。沙门氏菌能产生辛酯酶,这一性能是除沙门氏菌外的各属肠杆菌科细菌所不具备的。以4-***伞形***辛酯(MUCAP)为底物,经沙门氏菌的辛酯酶降解后,释放出4-***伞形***(4MU),在紫外灯下观察其发出的蓝色荧光。
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二，血清免疫学方法
免疫学技术是利用特异性抗原抗体反应,观察和研究组织细胞、特定抗原(抗体)的定性和定量技术。为了显示和观察这种抗原抗体反应,需要预先将某种标记物结合到抗体上,借标记物的荧光或酶的有色反应、放射性或高电子密度,在光镜或电镜下进行定性、定位或定量研究。
荧光抗体技术
酶联免疫技术
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三，分子生物学方法
分子生物学及分子遗传学的发展 ,使人们对微生物的认识逐渐从外部结构特征转向内部基因结构特征 ,微生物的检测也相应的从生化、免疫方法转向基因水平的检测。
核酸杂交法
PCR及其衍生技术
基于16S rRNA的检测技术
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四，分子生物学与免疫学相结合的方法
免疫 PCR (immuno polymerase chain reaction , IM PCR)
PCR-ELISA
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五，用生物传感器进行病原微生物的鉴定
生物传感器是将新兴的传感器技术和分子诊断技术相结合而成的一种新技术。生物传感器包含两部分,即分子识别器件和换能器。
利用大肠杆菌抗体的免疫吸附反应,使用集成化SPR 传感器快速检测大肠杆菌O157 : H7 ,采用亲和素- 生物素系统放大检测的反应信号,并引入复合抗体作为二次抗体,使该传感器对大肠杆菌的检测限由106 cfu/ ml 下降到105 cfu/ ml。
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六，生物芯片
生物芯片技术是将生物大分子,如寡核苷酸cDNA、基因组DNA、肽、抗原以及抗体等固定在诸如硅片、玻璃片、塑料片、凝胶和尼龙膜等固相介质上形成生物分子点阵,当待测样品中的生物分子与生物芯片的探针分子发生杂交或相互作用后,利用激光共聚焦显微扫描仪对杂交信号进行检测和分析。
根据芯片上探针的分子种类而将之分为：DNA 芯片(即基因芯片) 和蛋白质芯片。
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七，蛋白质指纹图谱技术
蛋白质指纹图谱技术用于各种疾病特异性蛋白指纹的识别和判断,可以直接检测不经处理的尿液、血液或细胞裂解液等。人体血清里有成千上万个蛋白,人一旦发生了某种疾病,蛋白质成分就必然会起变化。
可以分析得出SARS与非SARS 病人血清中的蛋白质成分变化。该技术不是利用单独的蛋白质峰的出现和消失来判断SARS ,而是用5 个蛋白质峰的出现和消失来判断,好比刑侦破案中甄别5 个手指的指纹,故此称为“指纹图谱”。
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八，LAMP技术
环介导等温扩增(loop—mediated isothermal amplification，LAMP)技术是近年来发展出的一种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。与传统PCR方法相比，LAMP不需要热循环，为等温扩增。且由于LAMP反应中产生大量的副产物一白色焦磷酸钾沉淀，扩增产物可不经过电泳，通过肉眼观察或浊度计即可判定结果。
用于检测：丙型肝炎病毒(HCV) 、严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS—CoV) 、乙脑病毒(JEV) 、甲型流感病毒(AIV) 、 腮腺炎病毒(MV)等。
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谢谢
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