文档介绍：实验三琼脂糖凝胶电泳检测DNA
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实验目的
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实验原理
1. DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。
核酸为两性分子，在pH ，碱基上的氨基解离而磷酸基团中只有第一个磷酸解离，整个分子带正电； pH 8左右时，碱基几乎不解离，而磷酸全部解离，整个分子带负电。
在碱性环境下，不同的核酸分子由于具有相同的磷酸戊糖结构，几乎具有相同的电荷密度，其电泳行为线性分子在凝胶中的迁移率与其所含碱基对数目的对数值成反比。可以近似用于估算分子的大小。
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2. 琼脂糖介质结构均一，含水量大（98-99%），可通过调整琼脂糖的浓度改变孔径的大小，起到分子筛的作用。
琼脂糖凝胶电泳
200bp—50kb（分离范围广、方便）
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。
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3. 溴化乙锭（EB）是一种吖啶类染料，它在紫外灯照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中电泳时，琼脂糖凝胶中的EB就插入DNA分碱基对子中形成荧光络合物，使DNA发射的荧光增强几十倍，电泳后就可直接紫外灯照射下检测琼脂糖中的DNA。
EB结构与核酸碱基相似，容易插入DNA中，因而其有强的致癌性。
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器材与试剂
电泳仪、电泳槽、凝胶紫外透射仪、解剖刀、台式高速离心机、Eppendorf管、移液抢、恒温水浴锅、一次性手套、三角烧瓶
琼脂糖：根据需要用电泳缓冲液配成不同浓度。
本实验配制 1％ Agrose：
1g Agrose、
50～100ml ×TBE、
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核酸样品
DNA marker DL2000
电泳缓冲液：本实验选用TBE
6×上样缓冲液（ Loading buffer ）：
4℃贮存。增加样品密度，使样品带颜色，起指示作用。
% 溴酚蓝、% 二甲苯青FF、30％ 甘油水溶液
10mg/ml 溴化乙锭（EB）：贮存液，棕色瓶室温保存。。
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操作步骤
1、凝胶准备：×TBE配制1％琼脂糖凝胶。
① 称1g琼脂糖置三角瓶中，加100ml ×TBE；
② 微波炉加热大约1分钟，熔化琼脂糖；
③熔化的琼脂糖自然冷却到60～70℃时，加入EB（），并轻轻混匀。
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2、胶床准备：
①取出洗净并晒干的胶床和梳子
②将梳子垂直插入到胶床的小凹槽内，梳齿底端和床面有1mm的间隙。
③将胶床放在调整好的水平台上。
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3、铺胶：将冷却致60℃的凝胶倒入准备好的胶床内，凝胶厚度3～5mm。
4、室温下静置1小时左右，凝胶固化。将带凝胶的胶床置于电泳槽中，并使样品孔位于电场负极。
5、轻轻拔出固定在凝胶中的梳子。
原梳齿处 (样品孔) 即被缓冲液充满，如发现有气泡，应设法去除。
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7、样品准备：向核酸样品中加入约为样品体积1/6的上样缓冲液，用加样器轻轻混匀。例如，5微升的DNA样品+1微升的上样缓冲液，以此类推。
6、×TBE电泳缓冲液，以越过凝胶表面1～2mm为宜。
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